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石蠟切片免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟1.石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時(shí)，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2.取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3.每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過(guò)
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實(shí)驗(yàn)試劑1.包被緩沖液：(0.05mol/L，pH9.6的碳酸鹽緩沖液)Na2CO31.59gNaHCO32.93g蒸餾水1000ml4℃保存，一周內(nèi)用完。2.磷酸鹽緩沖液(PBS，PH7.4)NaCl8.0gKH2PO40.2gKCl0.2gNa2HPO4.12H2O3.65g蒸餾水1000ml3.洗滌液(0.01mol/L，pH7.4的PBST)1LPBS中加入0.5mlTween-204.封閉液(5%脫脂奶粉)5g脫脂奶粉加入100mlPBS緩沖液中。5.一抗及二抗稀釋液(2%脫脂奶粉)2
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實(shí)驗(yàn)試劑裂解液（pH8.5-9.0）：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調(diào)pH值至8.5-9.0備用；溶菌酶；蛋白酶抑制劑PMSF；1%SDS溶液；Trizol裂解液；無(wú)水乙醇；異丙醇；0.3M鹽酸胍；疏水性蛋白提取液（非裂解液）：1%TritonX-114，150mMNaCl,10mMTris-HCl，1mMEDTA，調(diào)pH值至8.0備用。實(shí)驗(yàn)設(shè)備高速離心機(jī)；超聲儀；透析袋；EP管；渦旋儀；水浴鍋等。實(shí)驗(yàn)步驟1.從新鮮樣品中提取總蛋白
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實(shí)驗(yàn)試劑細(xì)胞培養(yǎng)液成分為RPMI1640基本培養(yǎng)液10%胎牛血清1%三抗，PBS，凍存培養(yǎng)液(含10%DMSO或甘油)，Trypsine-EDTA消化液，液氮實(shí)驗(yàn)設(shè)備水浴鍋，35mm培養(yǎng)皿，37℃培養(yǎng)箱，無(wú)菌凍存管，低溫冰箱，超低溫冰箱實(shí)驗(yàn)材料已凍存的HEK293和HeLa細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞的復(fù)蘇1)保存細(xì)胞的冷凍管直接投入37℃溫水，不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化，解凍1分鐘；2)取出冷凍管，用酒精消毒后打開(kāi)管蓋，吸出細(xì)胞懸液，注入離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混合后低速離心，除去上清液，再用培養(yǎng)液重
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1、冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。3、可否使
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實(shí)驗(yàn)原理1.細(xì)胞經(jīng)甲基綠一呱咯寧混合液處理后，其中的DNA和RNA出現(xiàn)不同的呈色反應(yīng)，一般認(rèn)為這是由于帶有負(fù)電荷的核酸對(duì)堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力，且這兩種染料的作用有選擇性，甲基綠染高聚分子的DNA呈藍(lán)綠色，呱咯寧染低聚分子的RNA呈紅色。由此對(duì)細(xì)胞中的DNA和RNA進(jìn)行定位、定性、和定量分析。2.由于不同的蛋白質(zhì)分子所帶的堿性和酸性基團(tuán)的數(shù)目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理?xiàng)l件下，整個(gè)蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷多，則為酸性蛋白質(zhì)；帶正電荷多，則為堿性蛋白質(zhì)。據(jù)
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膜蛋白具有多種功能，在細(xì)胞識(shí)別、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、運(yùn)輸?shù)扔兄兄匾慕巧?，因此也是的藥物靶點(diǎn)。抽提膜蛋白主要是進(jìn)行蛋白組分析：常用的實(shí)驗(yàn)是非變性膠電泳、酶活分析、SDS-PAGE、westernblot等。本文敘述了總蛋白的抽提方法、和膜蛋白的提取方法。一、從新鮮樣品中提取總蛋白(簡(jiǎn)易法)1.自配裂解液(pH8.5-9.0)：50mMTris-HCl，2mMEDTA,100mMNaCl，0.5%TritonX-100，調(diào)pH值至8.5-9.0備用;用前加入100μg/ml溶菌酶，1μl/ml的蛋白
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科技文獻(xiàn)中有很多抗體標(biāo)記方法指南，我們往往難以選擇方法。本指南可以幫助您更好的理解標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)標(biāo)記方法及它們的優(yōu)缺點(diǎn)，同時(shí)還介紹了Lightning-Link一步法抗體標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)極大簡(jiǎn)化了抗體標(biāo)記步驟，利用該技術(shù)標(biāo)記抗體不需要您具備太多化學(xué)方面的知識(shí)，并且手頭操作時(shí)間僅需短短的30秒！抗體與標(biāo)記物在多種免疫實(shí)驗(yàn)（流式細(xì)胞術(shù),ELISA,westernblotting,免疫組化等）中，抗體被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)和定量抗原。直接識(shí)別抗原的抗體被稱(chēng)為一抗（primaryantibody），賦予檢測(cè)的特異性
