聯(lián)系電話
上海雅吉生物科技有限公司
初級會員·9年
初級會員·9年
- 聯(lián)系人：
- 高杰
- 電話：
- 021-34661276
- 手機(jī)：
- 15821073967
- 售后：
- 15301693058
- 傳真：
- 021-34661276
- 地址：
- 上海市閔行區(qū)元江路5500號第1幢5658室
- 網(wǎng)址：
- www.yajimall.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
-
目前常用比色法測定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍(lán)法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優(yōu)缺點(diǎn)，大家可以根據(jù)具體情況選取。按相應(yīng)蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大，大家可以根據(jù)具體情況選取。Bradford法（考馬斯亮藍(lán)法）:考馬斯亮藍(lán)G-250
-
一、放射免疫分析的基本試劑（一）標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品是放射免疫分析法定量的依據(jù)，由于以標(biāo)準(zhǔn)品的量用來表示被涮物質(zhì)的量，故標(biāo)準(zhǔn)品與被測物質(zhì)應(yīng)當(dāng)化學(xué)結(jié)構(gòu)一致并具有相同免疫活性。標(biāo)準(zhǔn)品作為定量的基準(zhǔn)。應(yīng)要求高度純化。標(biāo)準(zhǔn)品除含量應(yīng)具有準(zhǔn)確性外，還應(yīng)具備穩(wěn)定性，即在合理的貯存條件下保持原來的特性。按實(shí)驗(yàn)要求，將標(biāo)準(zhǔn)品用緩沖液配成含不同劑量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。（二）標(biāo)記物標(biāo)記抗原應(yīng)具備：①比放射性高，以保證方法的靈敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期盡可能長，標(biāo)記一次可較長時間使用，這對來之不易的抗
-
原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系細(xì)胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細(xì)胞可確立為細(xì)胞系。若有條件能開展單細(xì)胞克隆、純化，經(jīng)大量擴(kuò)增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱之為細(xì)胞株或克隆細(xì)胞。此過程稱為細(xì)胞的純化或細(xì)胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和
-
無血清培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求，但對有些實(shí)驗(yàn)卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。無血清培養(yǎng)基的基本配方:
-
CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與酵母細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)比較
CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)與畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是當(dāng)前發(fā)展前景看好的兩個表達(dá)系統(tǒng)，為了能夠更加直觀地對兩個表達(dá)系統(tǒng)有一定的認(rèn)識，特意在此篇中對兩個表達(dá)系統(tǒng)作一定的比較，從而能夠更進(jìn)一步的對兩個表達(dá)系統(tǒng)有更深的了解1．CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)（1）優(yōu)點(diǎn)CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞，既可以貼壁生長。也可以懸浮生長。目前常用的CHO細(xì)胞包括原始CHO和二氫葉酸還原酶雙倍體基因缺失型(DHFR-)突變株CHO。近年來，為降低生產(chǎn)成本和減少血制品帶來的潛在危害性，動物細(xì)胞生產(chǎn)開始使用無血清培養(yǎng)基(SFM)，但SFM往往導(dǎo)致細(xì)胞 -
腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是多的。另外腫瘤對人類是威脅大的疾病。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)對闡明和解決癌癥將起著不可估量的作用。一、組織培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性腫瘤細(xì)胞與體內(nèi)正常細(xì)胞相比，不論在體內(nèi)或在體外，在形態(tài)、生長增值、遺傳性狀等方面都有顯著的不同。生長在體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞和在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞，其差異較小，但也并非*相同。培養(yǎng)中的腫瘤細(xì)胞具以下突出特點(diǎn)：（－）形態(tài)和性狀培養(yǎng)
-
一.細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理細(xì)胞培養(yǎng)是用酶消化法將組織碎塊分離成單個細(xì)胞，用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，在體外適宜條件下，使細(xì)胞生長繁殖，并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。細(xì)胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)主要不同點(diǎn)在于原始培養(yǎng)的對象不同。細(xì)胞培養(yǎng)使用的是單個細(xì)胞懸液，組織培養(yǎng)使用的是組織塊(0．5～1立方毫米)或薄片(厚0．2毫米)，而器官培養(yǎng)使用的是器官原基或器官的一部分或整個器官。在組織培養(yǎng)中，細(xì)胞自組織塊周圍移出并生長，細(xì)胞在生長過程中總有移動(運(yùn)動)或其它變動，這樣就使被培養(yǎng)的組織難以長期維持其原有的結(jié)構(gòu)和功
-
CHO細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染與基因表達(dá)
1、pcDNA3.1＋-gD的線性化:pcDNA3.1＋使用說明書推薦了以下幾個酶作為線性化酶(BglⅡMfeⅡBst1107ⅠEam1105ⅠPvuⅠScaⅠSspⅠ),通過DNAMAN分析gD序列發(fā)現(xiàn)其帶有MfeⅡ酶切位點(diǎn)。2、轉(zhuǎn)染前一天,在60mm的dish中接種8×105個細(xì)胞,加入5ml培養(yǎng)基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培養(yǎng),至轉(zhuǎn)染時要求細(xì)胞40%-80%匯合。3、通過分光光度計(jì)測定pcDNA3.1＋-gD的濃度,用不含血清、抗生素、蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基稀釋2.5ug的pcDN
