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TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法
細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。然后大約30﹪的染色體DNA在Ca2和Mg2依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180～200bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞 -
1、目的：1.1了解噬菌體效價(jià)的含義及其測定原理。1.2學(xué)會(huì)檢查噬菌體的方法。1.3掌握用雙層瓊脂平板法測定噬菌體效價(jià)的操作技能。2、原理：噬菌體是一類專性寄生于細(xì)菌和放線菌等微生物的病毒，其個(gè)體形態(tài)極其微小，用常規(guī)微生物計(jì)數(shù)法無法測得其數(shù)量。當(dāng)烈性噬菌體侵染細(xì)菌后會(huì)迅速引起敏感細(xì)菌裂解，釋放出大量子代噬菌體，然后它們?cè)贁U(kuò)散和侵染周圍細(xì)胞，終使含有敏感菌的懸液由混濁逐漸變清，或在含有敏感細(xì)菌的平板上出現(xiàn)肉眼可見的空斑──噬菌斑。了解噬菌體的特性，快速檢查、分離，并進(jìn)行效價(jià)測定，對(duì)在生產(chǎn)和科研工作
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以蛋白質(zhì)和結(jié)構(gòu)與功能為基礎(chǔ)，從分子水平上認(rèn)識(shí)生命現(xiàn)象，已經(jīng)成為現(xiàn)代生物學(xué)發(fā)展的主要方向，研究蛋白質(zhì)，首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質(zhì)。蛋白質(zhì)的制備工作涉及物理、化學(xué)和生物等各方面知識(shí)，但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個(gè)組分分配率的差別，把它們分配到可用機(jī)械方法分離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，如鹽析，有機(jī)溶劑提取，層析和結(jié)晶等；二是將混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于來同區(qū)域而達(dá)到分離目的，如電泳，超速離心，超濾等。在所有這些方法的應(yīng)用中必須注意保存生物大分子的完整
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細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的特點(diǎn)及檢驗(yàn)的筆記
近看大家常提到支原體污染，就翻了翻書，做了些筆記，現(xiàn)在貼出來和大家分享：支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(小直徑0．2um)并獨(dú)立生活的微生物。約有1%可通過濾菌器。支原體無細(xì)胞壁形態(tài)呈高度多形性。可為圓形、絲狀或梨形。支原體形態(tài)多變，在光境下不易看清內(nèi)部結(jié)構(gòu)。電鏡下觀察支原體膜為三層結(jié)構(gòu)。其中央有電干密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。橫斷面與細(xì)胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。支原體代謝需固醇類物質(zhì)、部分種類需要精氨酸、 -
前言自然殺傷細(xì)胞(NatureKillerCells,NK)是骨髓衍化的淋巴細(xì)胞，其初通過巨大的顆粒性狀被識(shí)別。NK細(xì)胞能自發(fā)殺滅多種腫瘤細(xì)胞，同時(shí)還可保護(hù)正常的細(xì)胞，從而被認(rèn)為是癌癥的克星。重要的是，不管是在胞內(nèi)還是胞外，NK細(xì)胞不需要免疫接種或提前激活，就能夠自發(fā)溶解特定的腫瘤靶細(xì)胞，而T細(xì)胞必須要通過抗原遞呈細(xì)胞的協(xié)助才能發(fā)揮作用。許多胞內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)表明,除了外滲出和滲入腫瘤組織的能力外，NK細(xì)胞還有望具有抗腫瘤的能力。研究發(fā)現(xiàn)缺失NK細(xì)胞的小鼠在致癌物誘下更容易發(fā)產(chǎn)生癌癥。另外，缺乏NK細(xì)
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活體成像中熒光色素標(biāo)記細(xì)胞的方法舉例活體光學(xué)成像(OpticalinvivoImaging)主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）技術(shù)與熒光（fluorescence）技術(shù)。生物發(fā)光是用熒光素酶(Luciferase)基因標(biāo)記細(xì)胞或DNA，今天，生物發(fā)光標(biāo)記物可以標(biāo)記到任何一種基因上，使對(duì)基因功能的全面細(xì)致研究成為現(xiàn)實(shí)。而熒光技術(shù)則采用熒光報(bào)告基團(tuán)（GFP、RFP,Cyt及dyes等）進(jìn)行標(biāo)記，利用熒光蛋白在外源光源或是內(nèi)源發(fā)光照射下被激發(fā)產(chǎn)生的熒光作為檢測信號(hào)。研究人員能夠利用一套
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一氧化氮（NO）信號(hào)通路研究一氧化氮合酶（NOS）抑制劑研究背景：一氧化氮（NO）是自分泌和旁分泌的信號(hào)通路分子，可以擴(kuò)散進(jìn)入生物膜。發(fā)揮作用時(shí)間很短（幾秒鐘），主要的生理功能是促進(jìn)血管動(dòng)態(tài)平衡。它能夠抑制平滑肌收縮生長，阻止血小板凝聚以及防止白細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞粘附。另外它還參與免疫防御系統(tǒng)，神經(jīng)傳遞，血管生成等過程。NO的下游靶標(biāo)包括鳥苷酸環(huán)化酶和NF-κB，前者可以提高cGMP水平，后者在iNOS基因表達(dá)作為重要的轉(zhuǎn)錄因子。體內(nèi)NO水平和信號(hào)失調(diào)常發(fā)生于某些疾病狀態(tài)。糖尿病病人具有低于的NO水
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)總結(jié)
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的富集1、給13-14天的孕鼠注射大約0.5ml阿佛丁。當(dāng)鼠麻醉后，實(shí)施斷頸法處死小鼠。2、用70％乙醇擦拭腹部，把皮膚向后拉，暴露出腹膜。用消毒過的工具，剪開腹壁以暴露出子宮角。將子宮角移到10cm的皿里。用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。3、用剪刀剪開每一測的胚囊,并將胚胎移到培養(yǎng)皿中。4、用兩副鐘表鑷子將胎盤和膜與胚胎分離開，分離后切除內(nèi)臟（所有深色的東西）。將胚胎轉(zhuǎn)移到(有蓋)培養(yǎng)皿中，用10ml不含鈣鎂離子的PBS洗三遍。5、用帶有彎鉤的眼科剪將組織剪碎，當(dāng)你剪的
