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相關(guān)專題Bradford法檢測蛋白濃度專題考馬斯亮藍(lán)法也稱考馬斯藍(lán)染色法(coomassiebluestaining)又稱Bradford法。由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來越廣泛的應(yīng)用?？捡R斯亮藍(lán)G-250(CoomassiebrilliantblueG-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，大光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-25
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小鼠睪丸、附睪及輸精管精子采集、運(yùn)動能力檢測與結(jié)構(gòu)觀察實(shí)驗(yàn)
本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖钦莆招∈蟛G丸、附睪及輸精管精子采集方法；掌握血球計(jì)數(shù)板法精子計(jì)數(shù)和運(yùn)動能力檢測的方法；通過睪丸、附睪及輸精管精子運(yùn)動能力檢測，認(rèn)識精子在睪丸產(chǎn)生后，在附睪內(nèi)成熟的過程；掌握精子抹片方法；掌握染色法進(jìn)行精子結(jié)構(gòu)觀察和頂體結(jié)構(gòu)觀察的方法，認(rèn)識精子的正常結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)方法原理哺乳動物的精子形成后必須經(jīng)過在附睪內(nèi)發(fā)生一系列形態(tài)、生理和生化方面的變化而終達(dá)到成熟后，才能獲得向前運(yùn)動的能力，這種向前運(yùn)動是精子受精能力的重要指標(biāo)。哺乳動物精子包括頭部和尾部二個主要部分，頸部介于頭部和尾部之間，形成頭部 -
殺傷功能是機(jī)體免疫功能的一個重要方面，免疫系統(tǒng)中有多種具有殺傷功能的靶細(xì)胞，如自然殺傷細(xì)胞（NK）、細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）、具有ADCC作用的單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)方法原理NK細(xì)胞存在于人或動物外周血、脾臟、淋巴結(jié)和骨髓中，能殺傷某些腫瘤細(xì)胞、病毒感染靶細(xì)胞，無需抗原或有絲分裂原刺激，也不依賴抗體或補(bǔ)體，在機(jī)體殺傷腫瘤、防御感染及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。LAK是NK或T細(xì)胞在體外高劑量IL-2誘導(dǎo)下，獲得能殺傷NK抵抗的腫瘤細(xì)胞的功能，在過繼免疫治療腫瘤中已得到廣泛的應(yīng)用。通過將同位素51Cr
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原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)檢測凋亡
（一）原理凋亡細(xì)胞是由于內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的激活后，將DNA切割成許多雙鏈DNA段以及高分子量DNA單鏈斷裂點(diǎn)（缺口），暴露出大量3-羥基末端，如用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）將標(biāo)記的dUTP進(jìn)行缺口末端標(biāo)記，則可原位特異地顯示出凋亡細(xì)胞。主要應(yīng)用的是熒光標(biāo)記法和酶標(biāo)記法。（二）熒光標(biāo)記法1．材料與試劑采用德國Boehringer-Mannheim公司InSituCellDeathDetection試劑盒，或美國Oncor公司ApopTagTM試劑盒，包括：⑴生物素標(biāo)記的-Dutp(Biotin -
TUNEL與ELISA檢測凋亡的方法比較TUNEL法細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL）。由于正常的或正
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一、原理與目的多酚氧化酶是植物組織內(nèi)廣泛存在的一種含銅氧化酶，植物受到機(jī)械損傷和病菌侵染后，PPO催化酚與O2氧化形成醌，是組織形成褐變，以便損傷恢復(fù)，防止或減少感染，提高抗病能力。醌類物質(zhì)對微生物有毒害作用，所以傷口醌類物質(zhì)出現(xiàn)是植物防止傷口感染的愈傷反應(yīng)，因而受傷組織一般這種酶的活性就會提高。多酚氧化酶也可與細(xì)胞內(nèi)其他底物氧化相偶聯(lián)，起到末端氧化酶的作用。PPO的存在是水果、蔬菜褐變及營養(yǎng)喪失的主要原因之一。PPO氧化內(nèi)源的酚類物質(zhì)生成鄰醌，鄰醌再相互聚合成醌或蛋白質(zhì)、氨基酸等作用生成高分子
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一、試劑準(zhǔn)備1、新鮮配制冷的RIPA裂解緩沖液:150mMNaCL1%NP-40(去垢劑)0.1%SDS(去垢劑)2ug/mlAprotinin(蛋白酶抑制劑)(使用前加入)2ug/mlLeupeptin(蛋白酶抑制劑)(使用前加入)1mMPMSF(蛋白酶抑制劑)1.5mMEDTA(蛋白酶抑制劑)1mMNaVanadate(磷酸脂酶抑制劑)(任選)以上所有試劑均按比例溶于150mMNaCL溶液中。2、冷的PBS中加入1mMPMSF1.5mMEDTA1mMNaVanadate（釩酸鈉）(任選)3、
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你試一試這兩種方法:種：1）將細(xì)胞系放在冰上2）去除上清，用pH7。4的冷磷酸鹽緩沖液洗滌單層細(xì)胞兩次3）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min4)刮下單層細(xì)胞，4度下10000g5min離心5）溶液37度水浴10min以分離水相和去污劑相，然后37度下2000g離心5min6)收集水相留作分析7）用500ul冰冷的bufferC溶解去污劑相沉淀，冰浴2min后加溫，在按步驟6再次離心8）按步驟8再次抽提去污劑相，用bufferC將洗滌后的去污劑相稀釋到初始體積9）用等量的bufferA
