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在細(xì)胞生物學(xué)中，一個(gè)常見的問題是如何獲取與細(xì)胞功能相關(guān)的各種定量測量信息。在免疫細(xì)胞化學(xué)中也存在同樣的問題。制作免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本環(huán)節(jié)較多，只要有一個(gè)環(huán)節(jié)失誤就會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，除了需要精制的藥品外，還需要熟練的技術(shù)。那么，做成了理想的標(biāo)本后，如何進(jìn)行觀察，才能獲得盡量多的的各種定量信息，而且使這些信息能較客觀的反映出來，這就是本章的編寫目的。一、定量分析的重要性目前有許多研究免疫細(xì)胞化學(xué)的文章，是做定性和定位研究的。如有文獻(xiàn)中提到，P物質(zhì)在腦組織中存在于30處以上，這只是解決了定性定位問題，這些部
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疫沉淀是利用特異性抗體識別并分離抗原的方法。材料：上樣buffer的配方(用前現(xiàn)配):2ul1.25MTris-HCL,pH6.835uldistilledwater2.5ul2-mercaptoethanol12.5ul10%SDS10ul80%glycerol2ulbromphenolblueTNEbuffer:10mMTris-HClpH8.010mMNaCl0.5mMEDTA方法：1．用含有1%NP40的緩沖液重懸細(xì)胞，充分振蕩。2．在冰上孵育30分鐘或37℃孵育10—15分鐘3．轉(zhuǎn)入e
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（一）雙縮脲測定法1．原理蛋白質(zhì)中的肽鍵有雙縮脲反應(yīng)，在堿性溶液中與二價(jià)銅離子形成藍(lán)紫色的絡(luò)合物，在一定的范圍內(nèi)，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。此法特異性強(qiáng)，游離的氨基酸、小肽和核酸均不產(chǎn)生這種反應(yīng)，但此法不夠敏感，僅能測出毫克水平。2．試劑配制硫酸銅（CuSO4·5H2O）1.50g酒石酸鉀鈉5.00gH2O500.0ml10％*（不含*）300mlH2O加至1000ml此溶液可長期保存，如產(chǎn)生暗紅色沉淀，則應(yīng)廢棄重配。3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備⑴準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白1.0g（必要時(shí)須首先采用凱氏定
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厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個(gè)無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實(shí)際情況選用。1．厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有
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免疫組化結(jié)果常見問題分析(一)結(jié)果陰性的原因1.抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤；2.抗原修復(fù)不全，換修復(fù)液或加強(qiáng)修復(fù)；3.組織切片本身這種抗原含量低，設(shè)陽性對照片；4.血清封閉時(shí)間過長；DAB孵育時(shí)間過短；6.細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。(二)非特異性染色的原因（著色一片黃/背景深）1.抗體孵育時(shí)間過長，抗體濃度；2.多抗易出現(xiàn)非特異性，可選擇單抗；3.內(nèi)源性過氧化物酶和生物素滅活不夠；4.非特異性組分與抗體結(jié)合，延長血清封閉時(shí)間；5.DAB孵育時(shí)間過長或濃度過高；6.P
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腺相關(guān)病毒（AAV）在動物實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用
腺相關(guān)病毒屬于微小病毒科(parvovirus)，為無包膜的單鏈線狀DNA病毒，基因組大小約4.7kb。利用腺相關(guān)病毒可以將外源基因轉(zhuǎn)入動物組織和細(xì)胞中，具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達(dá)穩(wěn)定等多種優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于動物體內(nèi)研究。腺相關(guān)病毒血清型眾多（12種），不同血清型對不同組織親和性不同，因此在具體科學(xué)研究中，以下問題往往困擾著廣大科研工作者：選擇何種血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何選擇？注射多久檢測？本文就常見的注射部位（大腦、視網(wǎng)膜、肝臟、心臟和動脈、肺臟、腎臟、肌肉、 -
PCR反應(yīng)的大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生.污染原因(一)標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散，導(dǎo)致彼此間的污染.(二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.(三
