一、產(chǎn)品概述

CellFactory NIH-3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（貨號(hào)：HY-C027）是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究領(lǐng)域zui經(jīng)典、應(yīng)用zui廣泛的細(xì)胞系之一。該細(xì)胞源自NIH Swiss小鼠胚胎，具有高度的自發(fā)轉(zhuǎn)化敏感性和接觸抑制缺失特性，是研究細(xì)胞轉(zhuǎn)化、癌基因功能、DNA轉(zhuǎn)染及病毒學(xué)的理想工具。本文將詳細(xì)介紹NIH-3T3細(xì)胞的培養(yǎng)方法、操作要點(diǎn)及注意事項(xiàng)，助力科研人員獲得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

二、培養(yǎng)前準(zhǔn)備

1. 培養(yǎng)基配制

關(guān)鍵提示：NIH-3T3細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量敏感，建議使用高質(zhì)量、批次穩(wěn)定的胎牛血清，以確保細(xì)胞狀態(tài)良好。

2. 培養(yǎng)器具準(zhǔn)備

培養(yǎng)瓶：推薦使用25cm2或75cm2培養(yǎng)瓶

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液

   PBS：1×磷酸鹽緩沖液，用于細(xì)胞洗滌

離心管：15mL或50mL無(wú)菌離心管

三、細(xì)胞復(fù)蘇操作

1. 標(biāo)準(zhǔn)復(fù)蘇流程

    CellFactory推薦方法：

 (1)預(yù)熱培養(yǎng)基：將wan全培養(yǎng)基置于37℃水浴鍋預(yù)熱30分鐘

 (2)取出凍存管：從液氮中取出凍存管，迅速轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱數(shù)分鐘，讓殘余液氮揮發(fā)

 (3)快速解凍：將凍存管放入37℃水浴中快速晃動(dòng)（水不能沒(méi)過(guò)蓋子），1分鐘內(nèi)wan全融化

 (4)消毒轉(zhuǎn)移：用70%酒精消毒凍存管外壁，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含10mL預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中

 (5)離心收集：1100rpm室溫離心4分鐘

 (6)重懸接種：棄上清，用新鮮wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

注意：請(qǐng)勿直接復(fù)蘇到T75cm2大培養(yǎng)瓶，建議先使用T25cm2培養(yǎng)瓶。

四、細(xì)胞傳代操作

1. 傳代時(shí)機(jī)

  當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代。NIH-3T3細(xì)胞具有接觸抑制缺失特性，可過(guò)度生長(zhǎng)，但建議及時(shí)傳代以維持細(xì)胞狀態(tài)。

2. 傳代步驟

 (1)洗滌：吸去舊培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞1-2次，去除殘余血清

 (2)消化：加入0.25%胰蛋白酶-EDTA，37℃孵育2-3分鐘

 (3)觀察：顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，加入含血清培養(yǎng)基終止消化

 (4)收集：輕柔吹打細(xì)胞，使其wan全脫壁，轉(zhuǎn)移至離心管

 (5)離心：1100rpm室溫離心4分鐘

 (6)重懸傳代：棄上清，新鮮培養(yǎng)基重懸，按1:3至1:6比例傳代

關(guān)鍵要點(diǎn)：NIH-3T3細(xì)胞貼壁較松，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞。

五、細(xì)胞凍存操作

1. 凍存條件

2. 2. 22. 凍存步驟

 (1)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、狀態(tài)良好的細(xì)胞

 (2)胰酶消化收集細(xì)胞，離心后棄上清

 (3)用預(yù)冷凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整密度

 (4)分裝至凍存管，標(biāo)注細(xì)胞名稱、代次、日期

 (5)程序降溫盒中4℃預(yù)冷，-80℃過(guò)夜

 (6)次日轉(zhuǎn)移至液氮罐長(zhǎng)期保存

六、培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 接觸抑制缺失特性

  NIH-3T3細(xì)胞失去正常接觸抑制，可過(guò)度生長(zhǎng)形成多層細(xì)胞。建議：

 (1)及時(shí)傳代，避免細(xì)胞過(guò)度密集

 (2)保持適宜接種密度，確保細(xì)胞均勻分布

2. 轉(zhuǎn)化敏感性

 (1)該細(xì)胞具有高度自發(fā)轉(zhuǎn)化傾向，需注意：

 (2)控制傳代次數(shù)，建議使用低代次細(xì)胞

 (3)定期觀察細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理

3. 血清質(zhì)量

細(xì)胞對(duì)血清批次敏感，建議：

 (1)使用同一批次血清，保持實(shí)驗(yàn)條件一致

 (2)更換血清批次時(shí)，需進(jìn)行細(xì)胞適應(yīng)性培養(yǎng)

4. 無(wú)菌操作

 (1)所有操作在生物安全臺(tái)內(nèi)進(jìn)行

 (2)嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免污染

 (3)定期檢測(cè)支原體，確保細(xì)胞質(zhì)量

七、CellFactory質(zhì)量保證

八、應(yīng)用領(lǐng)域

CellFactory NIH-3T3細(xì)胞廣泛應(yīng)用于：

 (1)細(xì)胞轉(zhuǎn)化研究：癌基因功能、抑癌基因研究

 (2)病毒學(xué)研究：逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝、基因治療載體

 (3)分子生物學(xué)：DNA轉(zhuǎn)染、基因表達(dá)分析

 (4)藥物篩選：抗腫瘤藥物、細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)

 (5)信號(hào)通路：生長(zhǎng)因子信號(hào)、細(xì)胞周期調(diào)控

九、技術(shù)支持

CellFactory（西安禾洋生物科技有限公司）提供完整NIH-3T3小鼠胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方案及技術(shù)指導(dǎo)！

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