產品編號：HY-A001 | 英文名稱：Human Gastric Cancer Cell Line NUGC-4 | 細胞別稱：NUGC4/NU-GC-4

一、產品基本信息

二、細胞接收

1. 凍存細胞接收

如果是干冰運輸?shù)膬龃婕毎?，收到后請立即轉入液氮儲存或短暫（24h）放至-80°C冰箱保存，或直接進行細胞復蘇。

2. 活細胞接收

如果是T25瓶活細胞運輸：

1. 收到后用75%的酒精對T25瓶外表面進行消毒

2. 放在5% CO?、37°C的細胞培養(yǎng)箱靜置2h

3. 靜置后取出細胞瓶，在顯微鏡下觀察細胞貼壁情況和細胞匯合度

4. 分別在100×和40×下各拍2個不同視野的細胞照片記錄

處理建議：

● 如果匯合度達到80%以上的傳代密度，可以進行傳代操作

● 如果細胞匯合度未達到80%以上，棄掉瓶內培養(yǎng)基，更換新鮮專用培養(yǎng)基

注意事項：

● 收到細胞后，活細胞首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否漏液、渾濁等現(xiàn)象

● 凍存細胞若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)完、凍存管瓶蓋脫落、破損等異常情況，請務必拍照保留，并于收貨24h內與我們聯(lián)系

三、培養(yǎng)條件

四、細胞復蘇

準備工作

1. 將培養(yǎng)液置37°C水浴鍋預熱30分鐘

2. 將凍存的細胞從液氮中取出，轉移到-80°C冰箱，放置數(shù)分鐘讓殘余液氮揮發(fā)

復蘇步驟

1. 在超凈臺內用吸管吸取6-7mL培養(yǎng)液至15mL離心管中

2. 將細胞從-80°C冰箱取出，復蘇時稍稍甩動，去除殘留的干冰和液氮

3. 迅速用鑷子夾住蓋子放入37°C水浴中快速晃動（注意：水不能沒過蓋子），使其在1分鐘左右全部融化

4. 用酒精棉球擦拭凍存管外壁消毒，稍稍晾干

5. 用單道移液器將所有融化的細胞懸液轉至提前準備好的培養(yǎng)液中

6. 1100rpm室溫離心4分鐘收集細胞

7. 小心吸棄上清，用1mL新鮮培養(yǎng)液重懸細胞至單細胞懸液

8. 轉移至裝有4mL培養(yǎng)液的T25cm2培養(yǎng)瓶中，寫上細胞名稱、復蘇日期、代次

9. 放置37°C、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱內培養(yǎng)

注意：請勿直接復蘇到T75cm2瓶或10cm的皿。

五、細胞傳代

傳代時機

常規(guī)細胞長至80%-90%匯合度即可傳代。

傳代步驟

1. 在超凈臺內把培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液倒至廢液缸

2. 用1× PBS洗滌細胞1-2次（T25cm2培養(yǎng)瓶添加約2-3mL），以去除殘余的培養(yǎng)液和血清

3. 加入0.25%胰酶溶液（T25cm2培養(yǎng)瓶約1-2mL），輕輕晃動瓶子并使yi酶全部浸過細胞

4. 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱孵育1-2分鐘（若細胞難以消化，可適當延長孵育時間）

5. 在顯微鏡下觀察到大部分細胞變圓不貼壁，輕輕晃動和敲擊培養(yǎng)瓶兩側有大量細胞脫離時，立即加入2倍胰酶體積的培養(yǎng)液終止消化

6. 輕吹打細胞數(shù)次，使所有細胞脫壁（注意：吹散細胞時動作要輕柔）

7. 1100rpm室溫離心4分鐘

8. 棄上清，加2mL培養(yǎng)基重懸細胞

9. 按一定接種比例傳代，第一次建議1:3進行傳代

六、細胞凍存

凍存步驟

1. 按細胞傳代的方法，將細胞消化至單細胞懸液，加入培養(yǎng)基終止反應

2. 取20μL進行細胞計數(shù)

3. 1100rpm室溫離心4分鐘

4. 倒去上清，用1-2mL 4°C預冷的凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細胞

5. 調整細胞密度為1×10?-1×10?個細胞/mL

6. 將細胞懸液按1mL/管平均分裝至凍存管中，旋緊蓋子，貼好標簽（細胞名稱、代次、數(shù)量、凍存日期）

7. 將凍存管放置于4°C預冷的程序降溫盒中，15分鐘內轉移至-80°C超低溫冰箱

8. 過夜后，將凍存細胞轉移至液氮罐內長期保存

七、產品應用

NUGC-4細胞是胃癌研究領域的經(jīng)典體外模型，適用于：

● 胃癌發(fā)病機制研究：低分化腺癌的分子病理機制

● 腫瘤轉移研究：淋巴結轉移特性、侵襲轉移機制

● 藥物篩選：化療藥物敏感性評價、靶向藥物篩選

● 信號通路研究：IL-1α非依賴性炎癥信號通路

注意事項

1. 無菌操作：所有操作在生物安全臺內進行

2. 傳代時機：細胞密度達80%-90%時傳代，避免過度生長

3. 消化控制：胰蛋白酶消化時間不宜過長，避免細胞損傷

4. 輕柔操作：吹打細胞時動作輕柔，減少機械損傷

5. 定期鑒定：建議每6-12個月進行STR鑒定

6. 代次控制：建議使用低代次細胞進行實驗

7. 用途限制：限于科研用途

九、技術支持

CellFactory（西安禾洋生物科技有限公司）提供完整培養(yǎng)方案、實驗設計建議