產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)CPSF73（剪切與多聚腺苷酸化特異性因子73 kDa亞基）的兔多克隆抗體，貨號(hào)A301-091A。該抗體可識(shí)別人及小鼠來(lái)源的CPSF73蛋白，適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)?？贵w經(jīng)抗原親和純化，濃度為200 µg/ml，為前體mRNA 3‘端加工及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控研究提供了高特異性的檢測(cè)工具。

核心規(guī)格參數(shù)

項(xiàng)目 | 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) | CPSF73

反應(yīng)性 | 小鼠、人

應(yīng)用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第634位至C末端（第684位）區(qū)域

亞型 | IgG

偶聯(lián)物 | 非偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 200 µg/ml

保存條件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽溶液，含0.1% BSA和0.09%疊d化鈉

應(yīng)用方法與推薦稀釋度

蛋白質(zhì)印跡（WB）

所有WB實(shí)驗(yàn)使用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過(guò)夜孵育。

細(xì)胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）作為二抗。

免疫沉淀產(chǎn)物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以降低輕鏈非特異性信號(hào)。

推薦稀釋度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解液

操作要點(diǎn)：

1. 將6 µg抗體與含1 mg蛋白的細(xì)胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小時(shí)或過(guò)夜

3. 加入蛋白A/G瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時(shí)

4. 充分洗滌沉淀復(fù)合物（建議4-5次）

5. 使用SDS上樣緩沖液洗脫，煮沸變性后進(jìn)行WB檢測(cè)

臨床與研究意義

CPSF73的表達(dá)和功能異常與多種疾病相關(guān)：

在多種癌癥（如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌）中，CPSF73表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致下游癌基因mRNA的3’端加工效率改變。

突變或功能喪失可影響細(xì)胞增殖和分化。

高質(zhì)量的特異性CPSF73抗體對(duì)于以下研究至關(guān)重要：

前體mRNA 3‘端加工機(jī)制的解析

轉(zhuǎn)錄后調(diào)控與基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的研究

免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定新型CPSF復(fù)合物相互作用蛋白

RNA加工相關(guān)疾病模型的蛋白表達(dá)分析

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性注意事項(xiàng)

1. 保存溫度：2-8°C，請(qǐng)勿冷凍。緩沖液中含有BSA作為穩(wěn)定蛋白，可有效防止低濃度抗體（200 µg/ml）在儲(chǔ)存過(guò)程中的吸附損失。

2. 有效期：收貨之日起1年內(nèi)穩(wěn)定。

3. 防腐劑：緩沖液中含有0.09%疊d化鈉，使用時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。

4. 分裝建議：如需長(zhǎng)期使用，可小量分裝（例如20-50 µl/管），保存于2-8°C，避免反復(fù)取用導(dǎo)致的污染風(fēng)險(xiǎn)。

功能性?xún)?yōu)勢(shì)總結(jié)

1. C末端靶向表位（634-684）：該區(qū)域?yàn)镃PSF73特y的C端結(jié)構(gòu)域，與CPSF100相互作用及內(nèi)切酶活性調(diào)控相關(guān)；抗體特異性識(shí)別該區(qū)域可減少與其他CPSF亞基的交叉反應(yīng)。

2. 跨種屬反應(yīng)性（人/小鼠）：適用于人類(lèi)細(xì)胞系及小鼠組織樣本，便于利用轉(zhuǎn)基因小鼠模型開(kāi)展體內(nèi)功能研究。

3. 寬WB稀釋范圍（1:2000-1:10,000）：提供實(shí)驗(yàn)靈活性，可根據(jù)不同樣本中CPSF73的表達(dá)豐度優(yōu)化信噪比。

4. 親和純化+BSA穩(wěn)定配方：既保證了高特異性，又防止低濃度抗體在操作過(guò)程中的非特異性吸附，提高實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。

5. IP-WB一體化方案：配套抗輕鏈HRP二抗及豬血清封閉，有效消除沉淀中重鏈干擾，便于檢測(cè)CPSF73與CPSF100、CPSF160或其他加工因子的共沉淀。

應(yīng)用場(chǎng)景舉例

應(yīng)用場(chǎng)景 | 推薦實(shí)驗(yàn)方案

檢測(cè)不同細(xì)胞系或組織中CPSF73蛋白表達(dá)水平 | WB，1:5000稀釋?zhuān)瑱z測(cè)30-50 µg總蛋白

驗(yàn)證siRNA敲低CPSF73后的沉默效率 | WB，1:4000稀釋?zhuān)浜蟽?nèi)參（GAPDH或β-actin）

內(nèi)源性CPSF73與CPSF復(fù)合物其他亞基（如CPSF100、CPSF160）的相互作用 | IP（6 µg/mg裂解液），產(chǎn)物WB檢測(cè)互作蛋白

HeLa細(xì)胞核提取物中CPSF73的亞細(xì)胞定位（結(jié)合細(xì)胞分級(jí)分離） | WB，1:3000稀釋?zhuān)謩e檢測(cè)胞質(zhì)、核質(zhì)、染色質(zhì)結(jié)合組分

組蛋白mRNA加工研究（如siRNA處理后改變3’端加工效率） | IP產(chǎn)物中檢測(cè)組蛋白mRNA的3‘端剪切中間體（需結(jié)合RNA檢測(cè)方法）