產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)CSTF64（剪切刺激因子64 kDa亞基）的兔多克隆抗體，貨號(hào)A301-092A。該抗體特異性識(shí)別人源CSTF64蛋白，適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)?？贵w經(jīng)抗原親和純化，濃度為200 µg/ml，為前體mRNA 3‘端多聚腺苷酸化機(jī)制研究提供了高特異性的檢測(cè)工具。

核心規(guī)格參數(shù)

項(xiàng)目 | 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) | CSTF64

反應(yīng)性 | 人

應(yīng)用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

免疫原 | 第375-425位氨基酸區(qū)域

亞型 | IgG

偶聯(lián)物 | 非偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 200 µg/ml

保存條件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽溶液，含0.1% BSA和0.09%疊d化鈉

應(yīng)用方法與推薦稀釋度

蛋白質(zhì)印跡（WB）

所有WB實(shí)驗(yàn)使用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育條件為過(guò)夜孵育。

細(xì)胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）作為二抗。

免疫沉淀產(chǎn)物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中需添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以降低輕鏈非特異性信號(hào)。

推薦稀釋度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解液

操作要點(diǎn)：

1. 將6 µg抗體與含1 mg蛋白的細(xì)胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小時(shí)或過(guò)夜

3. 加入蛋白A/G瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時(shí)

4. 充分洗滌沉淀復(fù)合物（建議4-5次）

5. 使用SDS上樣緩沖液洗脫，煮沸變性后進(jìn)行WB檢測(cè)

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋度：1:200 - 1:1000

抗原修復(fù)：對(duì)于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。該步驟對(duì)于暴露CSTF64的表位、獲得清晰染色信號(hào)至關(guān)重要。

染色建議：

脫蠟、水化后，在檸檬酸緩沖液中微波或高壓加熱修復(fù)

冷卻后按常規(guī)IHC流程操作

建議同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照（兔IgG或未免疫血清）

產(chǎn)品背景信息

CstF復(fù)合物與mRNA 3‘端加工

真核生物前體mRNA的成熟需要經(jīng)過(guò)5’端加帽、剪接和3‘端剪切與多聚腺苷酸化。多聚腺苷酸化是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵步驟，直接影響mRNA的穩(wěn)定性、核輸出和翻譯效率。

CSTF64是剪切刺激因子（CstF）復(fù)合物的64 kDa RNA結(jié)合亞基。CstF是多聚腺苷酸化機(jī)器的重要組成部分，負(fù)責(zé)在AAUAAA信號(hào)的下游識(shí)別富含GU（尿苷）的元件，并協(xié)同CPSF復(fù)合物完成前體mRNA的3’端剪切和多聚腺苷酸添加。

CSTF64的分子功能與相互作用

在CstF復(fù)合物中，CSTF64與以下亞基相互作用：

CSTF1（CSTF50）：50 kDa亞基，參與復(fù)合物穩(wěn)定性

CSTF3（CSTF77）：77 kDa亞基，提供支架功能

CSTF64通過(guò)其RNA識(shí)別基序（RRM）特異性地結(jié)合前體mRNA 3‘非翻譯區(qū)的GU豐富序列。這一識(shí)別事件是高效剪切和多聚腺苷酸化所必需的。

臨床與研究意義

CSTF64的表達(dá)和功能異常與多種疾病相關(guān)：

在多種癌癥（如卵巢癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤）中，CSTF64表達(dá)失調(diào)，導(dǎo)致下游基因3’端加工改變、異常多聚腺苷酸化及基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)重塑。

某些遺傳性疾病的剪接和多聚腺苷酸化缺陷也與CSTF64的突變或表達(dá)異常有關(guān)。

高質(zhì)量的特異性CSTF64抗體對(duì)于以下研究至關(guān)重要：

前體mRNA 3‘端加工機(jī)制的解析

多聚腺苷酸化調(diào)控與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的研究

免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜鑒定新型CstF復(fù)合物相互作用蛋白

腫瘤組織中CSTF64的定位與表達(dá)水平分析（IHC）

RNA加工相關(guān)疾病模型的蛋白表達(dá)驗(yàn)證

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性注意事項(xiàng)

1. 保存溫度：2-8°C，請(qǐng)勿冷凍。緩沖液中含有BSA作為穩(wěn)定蛋白，可有效防止低濃度抗體（200 µg/ml）在儲(chǔ)存過(guò)程中的吸附損失。

2. 有效期：收貨之日起1年內(nèi)穩(wěn)定。

3. 防腐劑：緩沖液中含有0.09%疊d化鈉，使用時(shí)應(yīng)遵守實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范。

4. 分裝建議：如需長(zhǎng)期使用，可小量分裝（例如20-50 µl/管），保存于2-8°C，避免反復(fù)取用導(dǎo)致的污染風(fēng)險(xiǎn)。

功能性?xún)?yōu)勢(shì)總結(jié)

1. 靶向內(nèi)部功能區(qū)域（375-425）：該區(qū)域接近CSTF64的C端，參與與CSTF77的相互作用及RNA結(jié)合活性調(diào)節(jié)；抗體特異性識(shí)別該區(qū)域可減少與其他RNA結(jié)合蛋白的非特異性交叉反應(yīng)。

2. 三重驗(yàn)證應(yīng)用：IHC（帶pH 6.0檸檬酸修復(fù)推薦）、IP（6 µg/mg裂解液）、WB（1:2000-1:10,000）提供完整實(shí)驗(yàn)體系，尤其適用于多聚腺苷酸化機(jī)器中蛋白定位、互作及表達(dá)水平的多維度分析。

3. IHC優(yōu)化條件明確：推薦使用檸檬酸緩沖液pH 6.0進(jìn)行抗原修復(fù)，免去用戶自行摸索修復(fù)條件的耗時(shí)，確保FFPE組織染色成功率。

4. 親和純化+BSA穩(wěn)定配方：既保證了高特異性，又防止低濃度抗體在操作過(guò)程中的非特異性吸附，提高實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。

5. IP-WB一體化方案：配套抗輕鏈HRP二抗及豬血清封閉，有效消除沉淀中重鏈干擾，便于檢測(cè)CSTF64與CSTF50、CSTF77的共沉淀復(fù)合物。