CL-11細胞 操作說明書

產(chǎn)品名稱：CL-11細胞

中文名稱：人結(jié)腸癌細胞

細胞形態(tài)：上皮樣，貼壁細胞

傳代比例：1:2~1:3

培養(yǎng)體系：DMEM/F12 培養(yǎng)基 推薦HAKATA A19010；20%胎牛血清 推薦HAKATA HN-FBS-500；細胞培養(yǎng)

未加雙抗，客戶可視實際情況選擇添加

STR：Amelogenin X,Y CSF1PO 11 D2S1338 17,19 D3S1358 15,16 D5S818 12 D7S820 9(DSMZ)D8S1179 14D13S317 13,14 D16S539 11,13 D18S51 14 D19S433 14 D21S11 31,32.2 FGA 22,23 Penta

D 9,13Penta E 10,11 TH01 6,9 TPOX 8 vWA 16,17

凍存條件：凍存液：90%FBS，DMSO 10%,或使用非程序凍存液：

細胞接收：

1：觀察有無破損漏液情況 ，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2 ：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài) ，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 ，放入培養(yǎng)箱靜止

2- 3小時穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3 ：請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。

4 ：產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南、STR 鑒定、支原體檢測報告。

5 ：若產(chǎn)品有異?；蚱渌蓡?，可隨時聯(lián)系客服

6.收到后，培養(yǎng)條件(完培配置)需跟保持一致，如有變動銷售另行告知

僅限于科學(xué)研究 ，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞復(fù)蘇：

1) 準備工作：將培養(yǎng)液置 37℃水浴鍋預(yù)熱 30 分鐘，隨后將凍存的細胞從液氮中取出，轉(zhuǎn)移

到-80℃冰箱，放置數(shù)分鐘讓殘余液氮揮發(fā)；

2) 在超凈臺內(nèi)用吸管吸取 6-7 mL 培養(yǎng)液至 15 mL 離心管中；

3) 將細胞從-80℃冰箱取出暫時放置于干冰里，復(fù)蘇時稍稍甩動，去除殘留的干冰和液氮，再迅速

用鑷子夾住蓋子放入 37℃水浴中快速晃動（注意：水不能沒過蓋子），使其在 1 分鐘左右

融化；

4) 在超凈臺內(nèi)，用酒精棉球擦拭凍存管外壁消毒，稍稍晾干。用單道移液器將所有融化的細胞懸液

轉(zhuǎn)至提前準備好的培養(yǎng)液中，蓋上蓋子，1100 rpm 室溫離心 4 分鐘收集細胞；

5) 超凈臺內(nèi)小心吸棄上清，用單道移液器吸取 1 mL 新鮮培養(yǎng)液重懸細胞至單細胞懸液，再轉(zhuǎn)

移至裝有 4 mL 培養(yǎng)液的 T25 cm2培養(yǎng)瓶 (或者 6cm 的皿) 中，寫上細胞名稱、復(fù)蘇日期、

代次，放置 37℃、5% CO2 飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

注意：請勿直接復(fù)蘇到 T75 cm2瓶或 10cm 的皿。

細胞傳代：

1) 常規(guī)細胞長至 80%-90%匯合度即可傳代。在超凈臺內(nèi)把培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)液倒至廢液缸，用 1×PBS（T25 cm2培養(yǎng)瓶添加約 2~3mL，T75 cm2培養(yǎng)瓶約 4~5 mL）洗滌細胞 1~2 次，以去除殘余的培養(yǎng)液和血清（血清含有胰酶的抑制因子）；

2) 加入相應(yīng)體積的胰酶溶液，具體參考附表 1，輕輕晃動瓶子并使胰酶浸過細胞，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱孵育 1~2 分鐘（若細胞難以消化，可適當延長孵育時間），待在顯微鏡下觀察到大部分細胞變圓不貼壁，輕輕晃動和敲擊培養(yǎng)瓶兩側(cè)有大量細胞脫離時，立即終止消化；

3) 加入 2 倍胰酶體積的培養(yǎng)液終止消化，并輕吹打細胞數(shù)次，使所有細胞脫壁；（注意：吹散細胞時注意要輕柔，盡量不產(chǎn)生氣泡或盡可能產(chǎn)生少量氣泡。）；

4) 用 10 mL 移液管轉(zhuǎn)移細胞懸液到一支 50 mL 離心管中，同一批次的細胞可以合并收集在一起，視情況用適量 PBS 將培養(yǎng)瓶里的殘余細胞洗下來，一起加到 50mL 離心管中。蓋上蓋子，做好標記；

5) 1100 rpm 室溫離心 4 分鐘，離心后，打開蓋子棄上清，加 2mL 培養(yǎng)基重懸細胞；

6) 細胞按照一定的接種比例傳代，按照 1：3 進行傳代，若細胞在兩天內(nèi)長滿可增加傳代比例，若細胞生長三四天還未長滿，可適當縮小傳代比例。

細胞凍存：

1) 按細胞傳代的方法，在超凈臺內(nèi)把培養(yǎng)瓶里的細胞進行消化至單細胞懸液，加入培養(yǎng)基終止反應(yīng)。所有液體轉(zhuǎn)移到一支 50 mL 離心管中。

2) 用移液管吹打混合均勻，取 20 μL 進行細胞計數(shù)；

3) 1100 rpm 室溫離心 4 分鐘，離心后，打開蓋子倒去上清，用 1~2 mL 4℃預(yù)冷的凍存液重懸細胞，隨后加入凍存液調(diào)整至密度為 1x106-1x107個細胞/mL。

4) 將細胞懸液按 1 mL/管平均分裝至凍存管中，旋緊蓋子，凍存管應(yīng)提前貼好細胞名稱、細胞代次、數(shù)量、凍存日期；

5) 將凍存管放置于 4℃預(yù)冷的程序降溫盒中，并在凍存結(jié)束的 15 分鐘之內(nèi)將程序降溫盒放置超低溫冰箱內(nèi)；

6) ge夜后，將凍存細胞轉(zhuǎn)移至液氮罐內(nèi)保存。