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BD Stain Buffer染色緩沖液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)

染色緩沖液（Stain Buffer, FBS）使用說明

適用范圍
本染色緩沖液（含胎牛血清，F(xiàn)BS）適用于以下樣本的單細(xì)胞懸液免疫熒光染色：

• 淋巴組織

• 骨髓

• 外周血

• 培養(yǎng)細(xì)胞

主要功能

1. 熒光試劑的稀釋與孵育

2. 流式檢測細(xì)胞的懸浮、洗滌及短期保存

配方特性

• 以中性pH（7.4）緩沖鹽溶液（DPBS）為基礎(chǔ)

• 添加熱滅活（56°C，30分鐘）胎牛血清（FBS）蛋白

• 含代謝抑制劑NaN?

核心優(yōu)勢
? 維持細(xì)胞活力
? 優(yōu)化pH敏感熒光染料信號(hào)（如FITC）
? 抑制抗原修飾：通過NaN?阻斷抗體交聯(lián)導(dǎo)致的細(xì)胞表面抗原脫落或內(nèi)化
? 信號(hào)穩(wěn)定性：配合低溫環(huán)境可防止免疫熒光染色信號(hào)衰減

推薦實(shí)驗(yàn)流程：流式細(xì)胞術(shù)（直接免疫熒光染色法）

已驗(yàn)證方案

1. 樣本制備

• 從以下樣本制備單細(xì)胞懸液（標(biāo)準(zhǔn)操作）：
  ? 淋巴組織
  ? 骨髓
  ? 外周血
  ? 培養(yǎng)細(xì)胞

2. 細(xì)胞洗滌

• 用預(yù)冷 Stain Buffer (FBS) 洗滌細(xì)胞兩次

• 離心沉淀細(xì)胞（300 × g，4°C）

• 重懸細(xì)胞至終濃度 2 × 10? 個(gè)細(xì)胞/ml（使用預(yù)冷緩沖液）

3. 分裝細(xì)胞

• 每份分裝 50 µl 細(xì)胞懸液（含 1 × 10? 個(gè)細(xì)胞）至：
  ? 流式管
  ? 微孔板圓底孔

4. 抗體孵育

• 用 Stain Buffer (FBS) 稀釋熒光抗體至最佳工作濃度

• 加入 10 µl 稀釋抗體 至細(xì)胞懸液

• 冰上避光孵育 20 分鐘（低親和力抗體可延長至 ≥45 分鐘）

5. 洗滌未結(jié)合抗體

• 按容器選擇洗滌體積：
  ? 微孔板：200 µl/孔
  ? 流式管：1 ml/管

• 離心（300 × g，5 分鐘）

• 小心吸棄上清（微孔板/流式管）或倒置吸干（流式管）

6. 重懸細(xì)胞

• 按容器選擇重懸體積：
  ? 微孔板：200 µl
  ? 流式管：0.5 ml

• 若使用微孔板，轉(zhuǎn)移細(xì)胞至流式管并調(diào)整終體積至 ~0.5 ml

7. 流式檢測

• 建議染色后 4 小時(shí)內(nèi)上機(jī)檢測

• 若需延遲：
  ? 用緩沖多聚甲醛固定（如 BD Cytofix™, Cat. No. 554655）
  ? 4°C 避光保存
  ? 固定后建議 1 周內(nèi)完成檢測

注意事項(xiàng)

1. 間接免疫熒光染色

• 若使用 未標(biāo)記/生物su化一抗，需重復(fù)步驟 4-5

• 生物su化抗體檢測時(shí)，建議換用 無生物su的 Stain Buffer (BSA)（Cat. No. 554657）

2. 胞內(nèi)抗原染色兼容性

• 本緩沖液適用于 表面抗原染色，后續(xù)可固定并進(jìn)行胞內(nèi)因子（如細(xì)胞因子）染色

• 染色后的細(xì)胞可暫存于 Stain Buffer (FBS)（4°C 避光），維持信號(hào)穩(wěn)定性

BD Stain Buffer染色緩沖液FBS  554656，BD Pharmingen™ Stain Buffer (FBS)