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當(dāng)前位置:西安禾洋生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>NALM-6人B淋巴白血病細(xì)胞培養(yǎng)攻略
NALM-6細(xì)胞是B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(B-ALL)研究領(lǐng)域的經(jīng)典體外模型,源自3歲患兒的外周血,具有明確的CD19/CD20/CD22陽性B細(xì)胞免疫表型及前B細(xì)胞特征,是研究B細(xì)胞白血病發(fā)病機(jī)制、hua療藥物敏感性及CAR-T免yi治療的理想工具。CellFactory(西安禾洋生物科技有限公司)提供的NALM-6細(xì)胞(貨號(hào):HY-A357)經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控,STR鑒定確認(rèn)細(xì)胞身份,支原體檢測陰性,CD19陽性率>95%,為科研人員提供可靠的實(shí)驗(yàn)材料。該細(xì)胞懸浮生長,呈典型圓形淋巴細(xì)胞形態(tài),倍增時(shí)間約24-36小時(shí),廣泛應(yīng)用于B-ALL基礎(chǔ)研究、靶向藥物篩選、免yi治療評(píng)價(jià)及基因編輯研究等領(lǐng)域。
NALM-6細(xì)胞的培養(yǎng)條件相對簡單,使用RPMI-1640培養(yǎng)基添加10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素,在37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)即可。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),將凍存管迅速放入37℃水浴中快速晃動(dòng)(注意水不能沒過蓋子),1分鐘內(nèi)wan全融化后,用70%酒精消毒外壁,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含10 mL預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm室溫離心5分鐘,棄上清后用新鮮培養(yǎng)基重懸,調(diào)整細(xì)胞密度至0.5-1×10? cells/mL,接種至培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。關(guān)鍵提示:NALM-6為懸浮細(xì)胞,復(fù)蘇后需及時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài),保持適宜密度,避免過度密集或稀疏。
細(xì)胞傳代需在密度達(dá)0.8-1.2×10? cells/mL(約80%-90%)時(shí)進(jìn)行,采用懸浮細(xì)胞傳代法——收集細(xì)胞懸液至離心管,1000 rpm離心5分鐘,棄上清,新鮮wan全培養(yǎng)基重懸,按1:2至1:4比例稀釋傳代,每2-3天傳代一次。細(xì)胞凍存需選擇對數(shù)生長期、狀態(tài)良好的細(xì)胞,離心收集后用預(yù)冷凍存液(90% FBS + 10% DMSO)重懸,調(diào)整密度為1-2×10? cells/mL,分裝至凍存管,程序降溫盒中-80℃過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮(-196℃)長期保存。培養(yǎng)過程中需注意輕柔操作,減少機(jī)械損傷;定期檢測支原體,確保細(xì)胞質(zhì)量;建議每6-12個(gè)月進(jìn)行STR鑒定和免疫表型驗(yàn)證。
NALM-6細(xì)胞的功能驗(yàn)證是其應(yīng)用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。該細(xì)胞具有完整的B細(xì)胞功能,可進(jìn)行免疫表型檢測(流式細(xì)胞術(shù)檢測CD19/CD20/CD22陽性,CD3/CD4/CD8陰性)、hua療藥物敏感性評(píng)價(jià)(長春新堿、柔紅霉素、門冬酰胺酶等)、CAR-T細(xì)胞治療評(píng)價(jià)(CD19-CAR-T殺傷效率、細(xì)胞因子釋放)以及基因編輯效率驗(yàn)證(CRISPR/Cas9基因敲除/敲入)。這些功能特性使NALM-6細(xì)胞成為B-ALL發(fā)病機(jī)制研究、靶向藥物開發(fā)、免yi治療優(yōu)化及基因功能研究的理想模型,在兒童白血病研究和臨床轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。
CellFactory(西安禾洋生物科技有限公司)致力于為全球科研人員提供高質(zhì)量的NALM-6細(xì)胞產(chǎn)品和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。我們提供完整的培養(yǎng)方案、流式免疫表型檢測指導(dǎo)、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)技術(shù)支持及CAR-T治療評(píng)價(jià)服務(wù),確保每一位用戶都能獲得狀態(tài)穩(wěn)定、功能完整的細(xì)胞,助力B細(xì)胞白血病基礎(chǔ)研究和臨床轉(zhuǎn)化研究的創(chuàng)新發(fā)展。如需了解更多產(chǎn)品信息或技術(shù)咨詢,請?jiān)L問CellFactory,或聯(lián)系我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。選擇CellFactory,選擇可靠的科研伙伴!
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