
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室日常培養(yǎng)中,支原體是最難察覺、污染率最高的污染源,整體細(xì)胞培養(yǎng)支原體感染發(fā)生率可達(dá) 63%,是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)失敗的常見誘因。本文從定義、理化特征、污染危害三方面科普支原體基礎(chǔ)知識點(diǎn)。
支原體是 1898 年被發(fā)現(xiàn)、無細(xì)胞壁、高度多形性的最小原核微生物,直徑僅 0.1~0.3μm,體型介于細(xì)菌與病毒之間,可生成絲狀、分枝狀結(jié)構(gòu),因此得名支原體。
核心物理特點(diǎn):可穿透常規(guī) 0.22μm 除菌濾器,常規(guī)過濾無法去除;能在無生命人工培養(yǎng)基自主增殖,常溫環(huán)境附著操作臺、移液器表面可存活 4~6 天,環(huán)境耐受能力強(qiáng)。
細(xì)胞培養(yǎng) 95% 污染來自四大支原體:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾支原體(牛源性),不同菌種來源不同:口腔支原體多來自操作人員,豬鼻支原體來源于豬源胰酶,萊氏支原體、精氨酸支原體多潛伏在胎牛血清、新生牛血清內(nèi)。
1. 細(xì)胞生長異常:細(xì)胞增殖變慢、形態(tài)畸變,拉絲、鋪展變形,直接影響傳代與藥物篩選實(shí)驗(yàn);
2. 培養(yǎng)基無直觀變化:污染后培養(yǎng)液清澈不渾濁、不變色,肉眼無法快速分辨,多數(shù)細(xì)胞傳代多代后才發(fā)現(xiàn)污染;
3. 干擾實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù):改變細(xì)胞代謝、基因表達(dá),造成轉(zhuǎn)染、藥物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)性差、結(jié)果失真;
4. 全實(shí)驗(yàn)室交叉?zhèn)魅?/span>:支原體隨耗材、移液器擴(kuò)散,造成整批細(xì)胞接連污染。
支原體無細(xì)胞壁、體型微小、環(huán)境耐受力強(qiáng)的生理特點(diǎn),決定了它成為細(xì)胞培養(yǎng)頭號隱性污染源。弄懂支原體基礎(chǔ)屬性,是做好后續(xù)污染源排查、檢測與消殺的前提。
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