原代肝細(xì)胞分離方法與膠原酶選擇指南【Nordmark】

在生命科學(xué)研究和藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域，高質(zhì)量的原代肝細(xì)胞是研究肝臟生理功能、藥物代謝和毒性評(píng)估的重要工具。體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的核心挑戰(zhàn)在于如何獲得形態(tài)結(jié)構(gòu)完整且保持高代謝活性的肝細(xì)胞。而膠原酶作為從肝臟組織中分離原代細(xì)胞的關(guān)鍵酶制劑，其選擇直接影響細(xì)胞的產(chǎn)量、活性和功能完整性。

一、原代肝細(xì)胞分離的應(yīng)用意義

原代肝細(xì)胞保留了體內(nèi)肝臟的大部分特性，能夠準(zhǔn)確反映藥物代謝、毒性反應(yīng)和疾病機(jī)制，因此在以下領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值：

•  藥物代謝和毒性研究

•  肝病發(fā)病機(jī)制研究

•  生物人工肝支持系統(tǒng)開(kāi)發(fā)

•  肝細(xì)胞移植治療

•  肝臟再生醫(yī)學(xué)研究

二、不同肝細(xì)胞分離方法的比較

以下小編簡(jiǎn)要匯總了部分常用的肝臟細(xì)胞提取的方法，并對(duì)以下方法的優(yōu)勢(shì)和不足之處進(jìn)行對(duì)比。

以下以大鼠肝臟為例向大家簡(jiǎn)要介紹肝臟細(xì)胞提取流程及選擇合適的膠原酶產(chǎn)品。一般情況下采用膠原酶灌注法來(lái)分離大鼠肝細(xì)胞。簡(jiǎn)要步驟如下：

1、提前對(duì)灌洗液進(jìn)行預(yù)熱；

2、將小鼠麻醉，打開(kāi)腹腔、暴露肝臟，包括門靜脈（PV）和下腔靜脈（IVC）；

3、在PV和IVC下方放置外科線，穿刺PV后結(jié)扎固定；

4、往PV內(nèi)以4ml/min注入Hanks液(小鼠為例)后剪斷IVC，期間可夾閉或打開(kāi)IVC有助于血液排除；

5、至少灌洗5min，直至肝臟變色；

6、往PV內(nèi)輸注Hanks液+膠原酶（推薦使用Nordmark Collagenase NB7D/NB8）混合液以4ml/min的速度持續(xù)消化(以大鼠為例，動(dòng)物體型越大，流速越快、膠原蛋白酶濃度越高)；

7、完成消化后去除膽囊和肝包膜，將肝臟實(shí)質(zhì)部分放置在容器中并用2~8℃預(yù)冷的Hanks液浸泡，轉(zhuǎn)移至生物安全柜進(jìn)行后續(xù)處理。

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•  低內(nèi)毒素：減少對(duì)細(xì)胞的非特異性刺激

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