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【試劑詳情】

英文名稱：Acridine Orange

中文名稱：吖啶橙

分子式：C17H19N3·HCl·ZnCl2

分子量：369.96

溶解性：溶于水，溶于乙醇、DMSO等部分有機(jī)溶劑

規(guī)格：1g，5g，10g（可按需包裝）

純度：95%+

儲存條件：干燥、避光，溫度不超過-20℃

注意事項(xiàng)：現(xiàn)配現(xiàn)用，不可頻繁解凍

【分子構(gòu)成與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)】

吖啶橙是一種陽離子熒光染料，其分子核心由三環(huán)芳香平面結(jié)構(gòu)（吖啶環(huán)）構(gòu)成，側(cè)鏈連接兩個(gè)N,N-二甲基氨基基團(tuán)。該平面結(jié)構(gòu)賦予分子強(qiáng)烈的π-π堆積能力，使其能夠通過嵌入方式插入雙鏈核酸的堿基對之間。吖啶橙的鹽酸鹽與氯化鋅復(fù)合物形式提高了其水溶性及儲存穩(wěn)定性。

熒光特性方面，吖啶橙在不同結(jié)合狀態(tài)下呈現(xiàn)顯著不同的發(fā)射光譜：當(dāng)嵌入雙鏈DNA時(shí)，其最大發(fā)射波長約為525 nm（綠色熒光）；當(dāng)與單鏈核酸或RNA結(jié)合時(shí)，由于聚集態(tài)的形成核酸選擇性熒光染料 吖啶橙，發(fā)射波長紅移至約650 nm（紅色熒光）?；谶@一光譜差異，吖啶橙可實(shí)現(xiàn)對DNA與RNA的選擇性區(qū)分。

【主要應(yīng)用領(lǐng)域】

1. 細(xì)胞周期與凋亡分析：在流式細(xì)胞術(shù)中，吖啶橙被廣泛用于區(qū)分細(xì)胞周期的不同階段（G0/G1、S、G2/M），其染色后DNA熒光強(qiáng)度與細(xì)胞DNA含量呈線性相關(guān)。實(shí)驗(yàn)典型濃度范圍為5–20 μg/mL，染色時(shí)間15–30分鐘，需在避光條件下操作以保證信號穩(wěn)定性。

2. 核酸選擇性染色與成像：在熒光顯微鏡下，吖啶橙可同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞核（DNA，綠色）與核仁及胞漿RNA（紅色），實(shí)現(xiàn)亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)可視化。對于固定樣本，推薦使用PBS稀釋至1–5 μg/mL進(jìn)行染色；活細(xì)胞染色則需更低濃度（0.5–2 μg/mL）并縮短孵育時(shí)間。

3. 核酸凝膠電泳顯色：作為替代溴化乙錠的熒光染料，吖啶橙可用于瓊脂糖凝膠中DNA的快速檢測。染色方法分為后染與預(yù)染兩種，后染濃度通常為3–5 μg/mL，浸泡時(shí)間20–40分鐘，使用UV或藍(lán)光激發(fā)即可成像。

【操作規(guī)范與儲存條件】

配制儲存液時(shí)，建議以去離子水或PBS緩沖液（pH 7.2–7.4）配制1 mg/mL母液，分裝后避光冷凍保存。母液在-20℃條件下可穩(wěn)定保存6個(gè)月，但反復(fù)凍融會導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降，建議單次分裝量滿足一次實(shí)驗(yàn)用量。

實(shí)際染色操作中，需根據(jù)樣本類型優(yōu)化染料濃度與染色時(shí)間。對于細(xì)胞懸液，推薦在染色完成后立即上機(jī)檢測，避免長時(shí)間放置導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加。對于組織切片，建議在染色后進(jìn)行兩次PBS漂洗（每次5分鐘）以降低背景熒光。

【有關(guān)試劑】

溴化乙錠（EB，CAS：1239-45-8）：經(jīng)典核酸嵌入型染料，但具有強(qiáng)致突變性，需謹(jǐn)慎操作

SYBR Green I（CAS：163795-75-3）：高靈敏度DNA染料，適用于實(shí)時(shí)定量PCR與凝膠成像

DAPI（CAS：28718-90-3）：細(xì)胞核特異性染料，優(yōu)先結(jié)合富含AT的DNA區(qū)域，適用于固定細(xì)胞核定位

Hoechst 33258（CAS：23491-44-3）：活細(xì)胞膜通透性核酸染料，常用于活細(xì)胞DNA含量分析

碘化丙啶（PI，CAS：25535-16-4）：膜不透過性染料，專門用于死細(xì)胞核染色與細(xì)胞周期檢測

注：該試劑僅用于科學(xué)研究，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或其他治療型用途。

本文試劑資料由西安凱新生物科技小華編輯整理。