伯樂 GelDoc Go 凝膠成像系統(tǒng)出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光信號(hào)弱或不出信號(hào)的問題，需要結(jié)合該機(jī)型的特點(diǎn)進(jìn)行分析。GelDoc Go 是一款緊湊型、觸屏操作的成像儀，采用非制冷 CMOS 傳感器（不同于 ChemiDoc 系列的制冷 CCD），靈敏度和信噪比相對(duì)有限，更適用于強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（如 ECL Plus、SuperSignal West Pico 等）或中等強(qiáng)度信號(hào)。以下是專門針對(duì) GelDoc Go 的詳細(xì)排查指南。
一、確認(rèn)基本的條件
1、成像模式是否正確
說明：在觸摸屏主頁選擇 “Chemi"（化學(xué)發(fā)光）模式，而不是“UV"或“White"。
2、樣品臺(tái)是否放置正確
說明：化學(xué)發(fā)光成像時(shí)必須使用黑色托盤（吸光、防止反光），不能放在 UV 透射臺(tái)或白光板上。
3、膜是否朝上
說明：確保蛋白面朝上（與發(fā)光底物接觸的一面朝向鏡頭），否則信號(hào)會(huì)被膜本身阻擋。
4、是否加足了發(fā)光底物
說明：底物必須均勻覆蓋膜表面，且孵育時(shí)間足夠（通常 1-2 分鐘）。
5、曝光時(shí)間是否足夠
說明： GelDoc Go 自動(dòng)曝光可能因信號(hào)太弱而提前終止。建議手動(dòng)設(shè)置長(zhǎng)曝光（如 30 秒→2 分鐘→5 分鐘）。
二、按可能性排序的逐步排查
A、Step 1：使用陽性對(duì)照驗(yàn)證儀器功能
這是快速判斷儀器是否正常的方法。
1、取一張用過的新膜（或?yàn)V紙），滴加 1-2 μL 稀釋的發(fā)光底物混合液（不加任何蛋白），直接放入暗箱用 Chemi 模式曝光 1 分鐘。
2、結(jié)果判斷：
能看到明顯白斑 → 儀器硬件正常，問題在樣品處理或試劑。
仍然無信號(hào) → 可能是儀器光電系統(tǒng)故障或設(shè)置問題，繼續(xù)下一步。
B、Step 2：檢查曝光設(shè)置（GelDoc Go 關(guān)鍵點(diǎn)）
GelDoc Go 的 CMOS 傳感器無制冷，長(zhǎng)時(shí)間曝光（>1 分鐘）會(huì)產(chǎn)生大量熱噪聲，但微弱信號(hào)仍需長(zhǎng)曝光。
1、在成像界面點(diǎn)擊 “Manual"，依次嘗試：
曝光時(shí)間：30 秒（較強(qiáng)信號(hào)）、2 分鐘（中等）、5 分鐘（極弱信號(hào)）。
像素合并（Binning）：選擇 2×2 或 4×4（顯著提升靈敏度，但分辨率下降）。
增益（Gain）：可設(shè)為“高"或手動(dòng)提高（會(huì)增加噪點(diǎn)）。
2、保存一張 “暗場(chǎng)（Dark）" 參考圖（關(guān)閉光源、蓋上鏡頭蓋）用于后續(xù)扣除背景。
C、Step 3：確認(rèn)樣品制備與試劑
1、蛋白上樣量
原因：每孔上樣量<1 μg（對(duì)于普通目標(biāo)蛋白）
解決：上樣 20-50 μg 全細(xì)胞裂解液，或使用過表達(dá)陽性對(duì)照。
2、轉(zhuǎn)膜效率
原因：大分子蛋白轉(zhuǎn)印不充分，或膜選錯(cuò)（NC 膜與 PVDF 結(jié)合能力不同）
解決：用麗春紅染色確認(rèn)轉(zhuǎn)印效果。PVDF 需甲醇激活。
3、抗體濃度
原因：一抗/二抗稀釋比例過高或孵育時(shí)間不足
解決：按說明書推薦下限濃度，4℃ 孵育過夜。
4、發(fā)光底物
原因：底物失效（過期或反復(fù)凍融），或敏感度不足（如 ECL vs ECL Plus）
解決：更換新鮮高靈敏度底物（如 SuperSignal West Femto）。GelDoc Go 建議使用 增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物。
5、膜干燥不均
原因：膜上殘留過多底物液體，或局部干燥形成結(jié)晶
解決：吸去多余液體，保持濕潤(rùn)但無自由流動(dòng)液體。
D、Step 4：清潔光學(xué)路徑（GelDoc Go）
GelDoc Go 的鏡頭和內(nèi)部保護(hù)窗非常容易積灰，且沒有平場(chǎng)校正功能（不同于 ChemiDoc 系列）。
1、關(guān)閉電源，用氣吹吹掉鏡頭表面的灰塵。
2、用無水乙醇潤(rùn)濕的無塵擦鏡紙輕輕擦拭鏡頭前端（圓形玻璃）。
3、打開暗箱，取下黑色托盤，用擦鏡紙清潔暗箱頂部?jī)?nèi)側(cè)的玻璃窗（鏡頭正對(duì)的位置）。
4、注意：不要在鏡頭上留下纖維或劃痕。
E、Step 5：檢查固件版本與恢復(fù)出廠設(shè)置
1、在觸摸屏進(jìn)入 設(shè)置 → 關(guān)于，檢查固件版本（新版本可從 Bio-Rad 下載）。
2、如果之前做過異常設(shè)置，可嘗試 恢復(fù)出廠設(shè)置（設(shè)置 → 維護(hù) → 恢復(fù)默認(rèn)）。
F、Step 6：硬件故障判斷
1、如果以上全部無效，且陽性對(duì)照也無信號(hào)，可能硬件損壞：
2、CMOS 傳感器失效（如無響應(yīng)）。
3、電路板或鏡頭快門卡死（聽不到快門開關(guān)聲）。
三、GelDoc Go 化學(xué)發(fā)光成像的典型設(shè)置參考
1、曝光模式
建議值：手動(dòng)
2、曝光時(shí)間
建議值：2-5分鐘
3、Binning
建議值：4×4
4、模擬增益
建議值：高（或 3×）
5、成像后處理
建議值：使用“增強(qiáng)對(duì)比度"或手動(dòng)調(diào)節(jié)亮度和 gamma
四、總結(jié)：GelDoc Go 化學(xué)發(fā)光信號(hào)弱的最常見原因
1、未選擇化學(xué)發(fā)光模式 或 未使用黑色托盤。
2、自動(dòng)曝光過早結(jié)束 – 必須使用手動(dòng)長(zhǎng)曝光（2-5 分鐘）+ 4×4 binning。
3、發(fā)光底物靈敏度不足 – GelDoc Go 對(duì) ECL 不敏感，需使用 ECL Plus 或更高靈敏度底物。
4、樣品蛋白量太低 – 建議 20-50 μg/孔，并確認(rèn)轉(zhuǎn)膜有效。
5、鏡頭或保護(hù)玻璃臟污 – 清潔后信號(hào)可提升 2-3 倍。
