遇到BioRad Mini-PROTEAN Tetra(1658004)電泳儀在運(yùn)行中電流突然下降,先別著急。這通常不是儀器損壞,而是電泳體系電阻突然增大導(dǎo)致的。在恒壓模式下,根據(jù)歐姆定律(I=U/R),電阻(R)增大,電流(I)自然會(huì)下降。
請(qǐng)按以下順序,從常見(jiàn)的原因開(kāi)始排查:
一、立即檢查(安全起見(jiàn),先暫停電泳)
1、觀察是否有氣泡斷開(kāi)電路?
(1)現(xiàn)象:電極絲上或凝膠底部附著了大氣泡,特別是鉑金電極絲與緩沖液之間。
(2)對(duì)策:斷電后,輕敲電泳槽外壁,或用移液管吹出氣泡。如果是凝膠底部與下槽緩沖液之間有氣泡(跑一條帶后突然發(fā)生),說(shuō)明玻璃板底部密封不嚴(yán),內(nèi)槽緩沖液漏光,需要重新加滿內(nèi)槽液。
2、檢查緩沖液液面
(1)內(nèi)槽(陰極):液面必須淹沒(méi)短板玻璃的上沿。如果液面下降,說(shuō)明內(nèi)槽漏液→補(bǔ)充緩沖液至正確刻度。
(2)外槽(陽(yáng)極):液面是否過(guò)低?如果外槽液面低于玻璃板下沿,電路也不通。
3、檢查緩沖液狀態(tài)
(1)是否使用過(guò)多次? Tris-甘氨酸緩沖液一般跑3次左右即需更換。多次使用后離子耗盡,導(dǎo)電能力急劇下降→更換新鮮緩沖液(內(nèi)、外槽都換)。
(2)是否配錯(cuò)或稀釋? 比如記成了5x或10x儲(chǔ)存液使用?→重新配制正確濃度的1x工作液。
二、如果以上都正常,檢查硬件
1、檢查電極插頭和導(dǎo)線
(1)紅黑插頭是否松動(dòng)或氧化?插拔幾次,確保插入電源接口。
(2)電源線是否有折斷(尤其插頭根部)?可用萬(wàn)用表測(cè)量通斷。
2、檢查鉑金電極絲
觀察電極芯(紅黑兩面的金屬絲)是否斷裂或嚴(yán)重腐蝕?如果斷了,需要更換電極芯組件(1658035/1658036)。
三、根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況判斷
1、如果是蛋白電泳,剛進(jìn)入分離膠時(shí):
這是正?,F(xiàn)象!當(dāng)樣品從濃縮膠(低pH,高Cl?)進(jìn)入分離膠(高pH,低Cl?,甘氨酸根開(kāi)始移動(dòng)),電阻會(huì)生理性增大,電流會(huì)緩慢下降20-40%,然后穩(wěn)定。無(wú)需處理,繼續(xù)跑完即可。但如果下降超過(guò)80%(比如從150mA降到20mA),則按上述排查。
2、如果是核酸瓊脂糖凝膠電泳用此設(shè)備?(雖然不常見(jiàn))
檢查TBE或TAE緩沖液濃度是否正確。如果用了去離子水,電流會(huì)為零。
四、現(xiàn)象 → 可能原因 → 解決方案
1、電流驟降為0或極低
原因:電路斷路
解決辦法:
(1)內(nèi)/外槽液面過(guò)低 → 加液
(2)電極插頭松動(dòng) → 插緊
(3)電極絲斷裂 → 更換
2、電流緩慢下降30-50%
原因:進(jìn)入分離膠階段(正常)
解決辦法:無(wú)需處理,繼續(xù)運(yùn)行
3、電流逐步下降至接近0
原因:緩沖液耗盡或稀釋
解決辦法:換新緩沖液
4、電流不穩(wěn)定,時(shí)有時(shí)無(wú)
原因:氣泡阻斷或接觸不良
解決辦法:排泡,清理插頭觸點(diǎn)
五、應(yīng)急處理流程
電流突然下降
暫停電泳 → 檢查:
1、內(nèi)槽液面? → 液面下降則補(bǔ)充
2、內(nèi)槽底部有無(wú)漏液? → 漏液則拆開(kāi)重裝玻璃板(確保密封條干凈、無(wú)破損)
3、外槽液面? → 過(guò)低則補(bǔ)充
4、新舊緩沖液? → 舊液則更換
5、氣泡? → 排泡
6、插頭連接? → 重插
7、電極絲斷裂? → 更換電極芯