產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的KSRP抗體（貨號A302-021A）是一款針對人源KH型剪接調(diào)控蛋白（KSRP）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體可識別小鼠及人類樣本中的KSRP蛋白，適用于免疫印跡、免疫沉淀及免疫組織化學(xué)檢測，為RNA降解、剪接調(diào)控及炎癥反應(yīng)研究提供可靠工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) KSRP（KH型剪接調(diào)控蛋白）

反應(yīng)性 小鼠、人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第125–175位氨基酸區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 200 µg/ml

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質(zhì)期 到貨后1年

免疫原與特異性驗(yàn)證

A302-021A抗體采用固相載體上固定的KSRP特異性表位進(jìn)行親和純化。該抗體識別的表位位于人KSRP蛋白的第100至150位氨基酸之間（參考編號Q92945.3，GeneID 8570）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

應(yīng)用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

實(shí)驗(yàn)方案要點(diǎn)：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（推薦）

細(xì)胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：KSRP在多種細(xì)胞中普遍表達(dá)，推薦起始稀釋度為1:2000。使用蛋白酶體抑制劑（如MG132）處理可觀察KSRP水平變化。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細(xì)胞裂解物

操作注意事項(xiàng)：

裂解緩沖液推薦使用含150–300 mM NaCl的非變性裂解液（如NP-40或Triton X-100緩沖液），以保留KSRP與RNA及蛋白的相互作用

裂解液中必須添加RNase抑制劑（如RiboLock）以保護(hù)RNA-蛋白復(fù)合物，同時添加蛋白酶抑制劑

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復(fù)合物

洗脫后建議使用輕鏈特異性二抗進(jìn)行WB檢測，避免重鏈信號干擾

復(fù)合物共沉淀：KSRP可與多種mRNA及microRNA加工復(fù)合物（如Dicer、TRBP）相互作用，IP產(chǎn)物可用于RNA免疫沉淀（RIP）或CLIP-seq研究。

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋范圍：1:200 – 1:1,000

抗原修復(fù)條件：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液或pH 9.0的Tris-EDTA緩沖液進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（兩種方案均可，可根據(jù)組織類型優(yōu)化選擇）

染色步驟建議：

1. 脫蠟、水化后，使用3% H?O?封閉內(nèi)源過氧化物酶

2. 熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（微波或高壓鍋加熱至沸騰，維持10–20分鐘）

3. 室溫冷卻，正常血清封閉30分鐘

4. 一抗4°C孵育過夜（推薦起始稀釋度1:500）

5. HRP標(biāo)記二抗及DAB顯色，蘇木精復(fù)染

組織表達(dá)譜：KSRP在腦、脾、肺、肝等多種組織中表達(dá)，定位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)（部分亞型）。

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于涉及活細(xì)胞或RNA完整性實(shí)驗(yàn)，需透析去除。

穩(wěn)定劑：0.1% BSA，降低非特異性吸附。

有效期：自到貨之日起1年。