產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的FBW7抗體（貨號A301-721A）是一款針對人源F-box/WD重復域蛋白7（FBW7）的兔多克隆抗體，經抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人源FBW7蛋白，適用于免疫沉淀及免疫組織化學檢測，為SCF E3泛素連接酶復合物調控及腫瘤抑制機制研究提供可靠工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細信息

靶標 FBW7（F-box/WD重復域蛋白7）

反應性 人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第50–100位氨基酸區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 1000 µg/ml（1 mg/ml）

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質期 到貨后1年

突出優(yōu)勢：該抗體濃度為1000 µg/ml，提供了充足的工作儲備，適合高通量IHC篩查及多次IP實驗。

免疫原與特異性驗證

A301-721A抗體采用固相載體上固定的FBW7特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人FBW7蛋白的第50至100位氨基酸之間（參考編號NP_361014.1，GeneID 55294）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

免疫原區(qū)域位于蛋白N端F-box結構域鄰近區(qū)域（50–100 aa），該區(qū)域在FBW7亞型中保守，但與其它F-box蛋白（如FBXW4、FBXW5）同源性較低，有助于獲得特異性識別

經抗原親和純化，顯著降低非特異性交叉反應

建議使用FBW7敲除細胞裂解液或敲低樣本作為IHC/IP陰性對照

應用方法與推薦工作濃度

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋范圍：1:1,000 – 1:5,000（超寬范圍，適應不同組織類型）

抗原修復條件：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復

修復方法：微波或高壓鍋加熱至沸騰，維持10–20分鐘，自然冷卻至室溫

染色步驟建議：

1. 脫蠟、水化后，使用3% H?O?封閉內源性過氧化物酶（10–15分鐘）

2. 熱誘導抗原修復（pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液）

3. 室溫冷卻，正常山羊或兔血清封閉30分鐘

4. 一抗4°C孵育過夜（推薦起始稀釋度1:2000）

5. 匹配的HRP標記二抗室溫孵育30–60分鐘

6. DAB顯色，蘇木精復染，封片觀察

組織類型參考：FBW7在多種正常組織中表達，包括睪丸、卵巢、腦、乳腺等；在多種腫瘤組織中可能出現(xiàn)表達下調或突變。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液推薦使用非變性裂解液（如含150 mM NaCl、0.5–1% NP-40的Tris緩沖液，pH 7.4），以維持FBW7與SCF復合物（Skp1、Cullin1、Rbx1）的相互作用

必須添加蛋白酶抑制劑（PMSF、蛋白酶抑制劑混合物）保護FBW7免于降解

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議進行WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 關鍵提示：FBW7的分子量約為70–80 kDa，與IgG重鏈（約55 kDa）位置不同，但仍建議使用輕鏈特異性二抗以獲得最干凈的背景，避免重鏈信號干擾其他共沉淀蛋白的檢測。

復合物共沉淀：FBW7作為SCF E3連接酶的F-box蛋白，可識別多個底物（如Cyclin E、Notch ICD、c-Myc、c-Jun等）。通過IP-FBW7，可檢測SCF核心組分（Skp1、Cullin1）的結合，或驗證底物在特定條件下的泛素化依賴性降解。

免疫印跡（WB）備注

雖然主規(guī)格中Applications未直接列出WB，但產品說明中包含了免疫沉淀后WB檢測的二抗方案。用戶可自行驗證該抗體在WB中的適用性。根據(jù)經驗，F(xiàn)BW7多克隆抗體通?？捎糜赪B，推薦起始稀釋度為1:500–1:2000，并使用5% Milk-TBST封閉。建議使用陽性對照（如HeLa、HEK293裂解液）進行預試驗。

靶點生物學背景：FBW7

FBW7（F-box/WD repeat-containing protein 7），也稱為FBXW7、hCdc4或Archipelago，是F-box蛋白家族的成員之一。F-box基序最早在Cyclin F中發(fā)現(xiàn)，負責介導與Skp1的相互作用，從而形成SCF（Skp1-Cullin1-F-box）E3泛素連接酶復合物。

核心功能：

1. SCF E3連接酶的底物識別亞基：FBW7通過其WD40重復域識別并結合具有磷酸化降解基序的底物蛋白，將其招募至SCF復合物進行泛素化，最終被26S蛋白酶體降解。

2. 關鍵底物及功能：

Cyclin E：FBW7介導Cyclin E的降解，調控細胞周期G1/S轉換。FBW7失活導致Cyclin E累積，引起基因組不穩(wěn)定。

Notch胞內結構域（NICD）：FBW7促進NICD的降解，從而負調控Notch信號通路，抑制細胞增殖和干細胞維持。

c-Myc、c-Jun、mTOR、Mcl1：FBW7還調控多種癌蛋白和抗凋亡因子的穩(wěn)定性，發(fā)揮廣泛的腫瘤抑制作用。

3. 腫瘤抑制：FBW7被認為是重要的腫瘤抑制因子，在多種人類癌癥（如結直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、白血病）中頻繁發(fā)生突變或表達下調。缺陷的FBW7導致其底物積累，促進腫瘤發(fā)生和發(fā)展。

分子特征：

分子量：約70–80 kDa（存在多種剪接變體）

結構域：N端F-box結構域（介導與Skp1結合）；C端WD40重復域（介導底物識別）

調控機制：FBW7本身受磷酸化、自身泛素化及轉錄水平調控。其腫瘤抑制功能與p53、AKT等多種信號通路交叉對話。

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致蛋白聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于活細胞或某些功能實驗，需通過透析去除。

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，提供穩(wěn)定的pH環(huán)境。

有效期：自到貨之日起1年。建議在瓶身標注收到日期，分裝成小份儲存于2–8°C以降低反復開管風險。