LSD1（KDM1A）是s個(gè)被發(fā)現(xiàn)的組蛋白去甲基化酶，特異性催化組蛋白 H3 第4位賴氨酸（H3K4）的單甲基化和二甲基化去除，在轉(zhuǎn)錄抑制、激活及表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮雙重功能。該抗體 A300-215A 經(jīng)抗原親和純化，靶向人 LSD1 蛋白 N 端第 50–100 位氨基酸區(qū)域，適用于染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）。特別地，其 WB 稀釋范圍高達(dá) 1:5,000–1:15,000，且 ChIP?seq 應(yīng)用已有文獻(xiàn)支持。本文從由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗BHC110/LSD1親和純化抗體（貨號：A300-215A）的規(guī)格、免疫原設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化流程、功能背景及故障排查等方面提供全面技術(shù)參考。

一、產(chǎn)品基本規(guī)格與儲存信息

參數(shù)| 內(nèi)容

靶標(biāo)| BHC110/LSD1（KDM1A）

反應(yīng)性 | 人類

應(yīng)用| ChIP、IHC、IP、WB

宿主/克隆性 | 兔 / 多克隆

形式| 完整 IgG

免疫原 | 第25至75位氨基酸之間（具體表位位于第50–100位）

亞型| IgG

標(biāo)記物 | 未標(biāo)記

純度| 抗原親和純化

抗原種屬|(zhì) 人類

濃度| 1000 µg/ml（1 mg/ml）

保存條件| 2?–?8?°C

有效期 | 自收貨之日起 1 年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含 0.09% 疊d化鈉

關(guān)鍵儲存提示：  

始終保存于 2–8?°C，嚴(yán)禁冷凍，冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚合并喪失活性。  

疊d化鈉為防腐劑，可能抑制 HRP 活性；若用于活細(xì)胞或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，需通過脫鹽柱去除。  

濃度采用比爾定律標(biāo)定（A280?=?1.4 對應(yīng) 1?mg/mL IgG），便于精確稀釋。

二、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

免疫印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋范圍：1:5,000 – 1:15,000（j高靈敏度，經(jīng)濟(jì)性突出）  

封閉液與抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶 / TBST  

一抗孵育：4?°C 過夜  

二抗推薦：Goat anti?Rabbit IgG (H+L) HRP（A120-101P）  

檢測方式：增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（ECL）

WB 優(yōu)化流程

1. 樣本制備：  

陽性對照：HeLa、HEK293、MCF?7 等人源細(xì)胞系全裂解液。  

裂解液：RIPA（含蛋白酶抑制劑），LSD1 穩(wěn)定表達(dá)，常規(guī)上樣 20–30?μg。

2. 電泳：使用 8–10% SDS?PAGE（LSD1 分子量約 110?kDa）。  

3. 轉(zhuǎn)印：PVDF 膜，250?mA 恒流 90 分鐘。  

4. 封閉：5% 牛奶 / TBST，室溫 1 小時(shí)。  

5. 一抗：用 5% 牛奶 / TBST 稀釋至 1:5,000–1:15,000（s次建議 1:5,000）。  

6. 洗滌：TBST 洗滌 3×10 分鐘。  

7. 二抗：HRP?山羊抗兔（1:10,000），室溫 1 小時(shí)。  

8. ECL 檢測。

預(yù)期結(jié)果：約 110?kDa 處單一條帶。若出現(xiàn)多條帶，可能為降解產(chǎn)物（常見約 55?kDa）或非特異，提高稀釋度至 1:15,000 可顯著改善。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

用量：6?μg 抗體 / mg 總蛋白裂解液  

裂解液：非變性條件（50?mM Tris pH 7.4, 150?mM NaCl, 1% NP?40，抑制劑 cocktail）。

IP 步驟

1. 裂解細(xì)胞，取 1?mg 總蛋白。  

2. 加入 6?μg A300-215A 抗體，4?°C 旋轉(zhuǎn)孵育過夜。  

3. 加入 Protein?A 磁珠，繼續(xù)孵育 2 小時(shí)。  

4. 洗滌 4–5 次，洗脫（SDS 上樣緩沖液，95?°C 10 分鐘）。  

5. WB 檢測（使用輕鏈特異性二抗消除重鏈干擾）。

注意：IP 后 WB 時(shí)，由于 LSD1 分子量 110?kDa，遠(yuǎn)高于重鏈（55?kDa），常規(guī)二抗也可使用；但為獲得最潔凈背景，推薦 抗兔 IgG 輕鏈 HRP 二抗 + 5% 正常豬血清（S100?020）。

免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry, IHC）

推薦稀釋范圍：1:500 – 1:2,000  

抗原修復(fù)：檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.0），高壓或微波熱修復(fù) 10–15 分鐘。  

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人組織切片。  

封閉：5% 正常血清/BSA，室溫 30 分鐘。  

檢測：HRP/DAB 或熒光二抗。

提示：LSD1 在多種細(xì)胞核中表達(dá)，IHC 染色應(yīng)為核陽性。建議使用扁桃體或乳腺癌組織作為陽性對照。

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）與 ChIP?seq

用量：10?μg 抗體 / ChIP 反應(yīng)（參照文獻(xiàn)：Ram O et al., Cell 2011;147(7):1628-39）  

靶標(biāo)：LSD1 占據(jù)的染色質(zhì)區(qū)域（通常為轉(zhuǎn)錄活躍或抑制性啟動(dòng)子）。  

實(shí)驗(yàn)建議：  

使用 1–2?×?10? 細(xì)胞 / ChIP 反應(yīng)。  

交聯(lián)：1% 甲醛，室溫 10 分鐘。  

染色質(zhì)剪切至 200–500?bp（超聲或酶切）。  

抗體用量 10?μg，4?°C 過夜孵育。  

Protein?A/G 磁珠捕獲，洗滌、洗脫、解交聯(lián)，DNA 純化后 qPCR 或測序。

文獻(xiàn)驗(yàn)證：先前批次抗體已成功用于 ChIP?seq（見上述 Cell 文章），該批次經(jīng)親和純化保留相同表位，預(yù)期性能一致。

三、該抗體的核心優(yōu)勢

四重應(yīng)用驗(yàn)證：ChIP、IHC、IP、WB 全覆蓋，一套抗體滿足從蛋白水平到染色質(zhì)水平的完整研究需求。  

極寬 WB 稀釋度（1:5,000–1:15,000）：1?mg 抗體可配制 5–15?L 工作液，性價(jià)比j高。  

文獻(xiàn)支持 ChIP?seq：引用明確，降低方法學(xué)驗(yàn)證風(fēng)險(xiǎn)。  

IHC 明確方案：提供檸檬酸修復(fù)條件和稀釋范圍，即用型參數(shù)。  

親和純化低背景：確保 IP 和 ChIP 特異性。  

液態(tài)穩(wěn)定保存：2–8?°C 一年，無需分裝凍融。