產(chǎn)品概述

V5標(biāo)簽抗體是一種用于檢測和純化V5表位標(biāo)記重組蛋白的高親和力工具。本產(chǎn)品為山羊來源的多克隆抗體（貨號：S190-119），由艾美捷Bethyl Laboratories推出，經(jīng)抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度為1 mg/ml。該抗體識別人工合成的V5標(biāo)簽肽段（GKPIPNPLLGLDST），適用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等多種應(yīng)用場景。

技術(shù)參數(shù)

參數(shù) | 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) | V5標(biāo)簽

應(yīng)用 | ELISA、ICC、IP、WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

亞型 | IgG

標(biāo)記 | 非偶聯(lián)

純化方式 | 抗原親和純化

濃度 | 1 mg/ml |

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 收貨之日起1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊d化鈉

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2–8°C，切勿冷凍。冷凍會導(dǎo)致抗體聚集和活性喪失。

有效期：自收貨之日起1年，在未受污染且按推薦條件儲存的情況下。

緩沖液組分：磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。

注意事項(xiàng)：疊d化鈉可能抑制過氧化物酶活性。若需將本抗體酶標(biāo)記或用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，請預(yù)先通過透析或超濾去除疊d化鈉。

應(yīng)用與方法參數(shù)

注意：并非所有列出的應(yīng)用均經(jīng)過生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室的直接測試。以下稀釋范圍為文獻(xiàn)參考值，用戶需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化。

推薦工作條件

應(yīng)用 | 推薦稀釋度/用量 | 備注

ELISA（檢測抗體） | 1:1000 – 1:30,000 | 作為一抗檢測V5標(biāo)簽蛋白

ELISA（包被用） | 1:100 – 1:500 | 將抗體直接包被于微孔板捕獲V5標(biāo)簽蛋白

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC） | 1:100 – 1:400 | 適用于細(xì)胞爬片或培養(yǎng)細(xì)胞的免疫熒光/染色

免疫沉淀（IP） | 1 – 4 µg/mg 裂解液 | 每毫克細(xì)胞裂解蛋白使用1–4 µg抗體

免疫印跡（WB） | 1:1000 – 1:30,000 | 過夜孵育，5%牛奶-TBST封閉

免疫印跡（WB）詳細(xì)方案

1. 封閉與抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST（Tris緩沖鹽溶液 + 0.1% Tween-20）。

2. 一抗孵育：推薦4°C搖床過夜（約16小時(shí)），稀釋度從1:5000開始摸索。

3. 二抗：使用驢抗山羊IgG重輕鏈抗體（貨號A50-101P）。由于本抗體來源于山羊，不可使用抗兔或抗小鼠二抗。

4. 檢測：根據(jù)二抗的標(biāo)記（HRP、熒光等）進(jìn)行化學(xué)發(fā)光或熒光成像。

優(yōu)化建議：由于本抗體為多克隆抗體，WB中可能出現(xiàn)非特異條帶。可通過提高稀釋度（如1:10,000–1:30,000）或增加洗滌次數(shù)降低背景。轉(zhuǎn)膜后使用麗春紅染色確認(rèn)蛋白上樣量。

免疫沉淀（IP）詳細(xì)方案

用量范圍：每毫克細(xì)胞裂解蛋白使用1–4 µg本抗體。對于高表達(dá)的重組蛋白，可選用1–2 µg/mg；對內(nèi)源性表達(dá)水平極低的蛋白，建議使用3–4 µg/mg。

對照設(shè)置：使用相同物種和亞型的非免疫山羊IgG作為陰性對照。

裂解液選擇：推薦使用非變性裂解緩沖液（如含蛋白酶抑制劑的NP-40或RIPA裂解液，離子強(qiáng)度適中），以維持標(biāo)簽蛋白的天然構(gòu)象和相互作用。

二抗選擇：IP后WB檢測時(shí)，若使用抗山羊IgG重輕鏈二抗，會檢測到IP抗體的重鏈（~55 kDa）和輕鏈（~25 kDa）。為避免干擾，可改用抗V5標(biāo)簽的直接標(biāo)記二抗，或使用Protein A/G磁珠進(jìn)行IP時(shí)選擇交聯(lián)抗體的策略。

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）詳細(xì)方案

樣本準(zhǔn)備：細(xì)胞爬片或多孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞，經(jīng)4%多聚甲醛固定15–20分鐘，0.2% Triton X-100透化（若檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白）。

封閉：使用5%正常驢血清或1% BSA-PBS封閉30–60分鐘。

一抗孵育：1:100–1:400稀釋本抗體，室溫孵育1–2小時(shí)或4°C過夜。

二抗：使用熒光標(biāo)記的抗山羊IgG（如Alexa Fluor 488/555/647標(biāo)記的驢抗山羊IgG），避免使用與固定劑產(chǎn)生自發(fā)熒光通道重疊的染料。

復(fù)染與封片：使用DAPI或Hoechst染色細(xì)胞核，封片后熒光顯微鏡觀察。

ELISA詳細(xì)方案

作為檢測抗體：將V5標(biāo)簽蛋白直接或通過捕獲抗體包被于ELISA板，封閉后加入1:1000–1:30,000稀釋的本抗體，孵育1小時(shí)，洗滌后加入HRP標(biāo)記的抗山羊IgG二抗，TMB顯色。

作為包被抗體：使用1:100–1:500稀釋的本抗體包被ELISA板（4°C過夜或37°C 2小時(shí)），封閉后加入含有V5標(biāo)簽蛋白的樣本，再使用酶標(biāo)記的標(biāo)簽特異性二抗或直接標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行檢測。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

物種交叉反應(yīng)：本抗體為山羊抗V5，如果實(shí)驗(yàn)樣本本身含有內(nèi)源性山羊IgG（如使用山羊血清封閉），可能會產(chǎn)生背景。建議使用驢抗山羊二抗或選擇合適的封閉血清（如正常驢血清）。

二抗匹配：檢測時(shí)務(wù)必使用抗山羊IgG的二抗，不可使用抗兔或抗小鼠的二抗。

多克隆背景控制：由于是多克隆抗體，WB中可能出現(xiàn)非特異性條帶，建議設(shè)置空載體轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解液對照，以區(qū)分特異信號。也可通過提高稀釋度（1:10,000以上）降低背景。

抗原表位可及性：若V5標(biāo)簽位于融合蛋白的C端且被高級結(jié)構(gòu)遮蔽，可能影響抗體結(jié)合。此時(shí)可嘗試在變性條件下（如WB、IP前煮沸樣品）或使用更強(qiáng)去垢劑的裂解液處理。

疊d化鈉去除：若需交聯(lián)抗體至瓊脂糖珠用于IP，疊d化鈉會抑制交聯(lián)反應(yīng)，請預(yù)先通過透析去除。

*本產(chǎn)品僅供研究使用，不用于診斷程序。