HSF95 Insect Cell Medium 昆蟲培養(yǎng)基（貨號：CW003）產(chǎn)品說明書

一、產(chǎn)品描述

二、產(chǎn)品特點

• 無血清配方，安全性更高：采用無血清設(shè)計，避免了血清來源的批次差異、病毒污染及成分不確定性等問題，不僅能顯著提升實驗結(jié)果的重復(fù)性與穩(wěn)定性，還能減少血清中雜蛋白對后續(xù)重組蛋白純化的干擾，更適用于生物制藥、蛋白功能研究等對實驗條件要求嚴(yán)苛的場景。

• 即用型設(shè)計，操作便捷：成品培養(yǎng)基已完成全部成分的精準(zhǔn)配制與無菌處理，開瓶后無需添加谷氨酰胺、血清、抗生素等任何額外成分，直接分裝使用即可，大幅節(jié)省實驗準(zhǔn)備時間，降低實驗人員的操作門檻。

• 廣譜適配性，培養(yǎng)效果優(yōu)異：可高效支持 sf9、High Five™ 等多種昆蟲細胞的懸浮培養(yǎng)馴化，能幫助細胞快速適應(yīng)懸浮生長狀態(tài)，且支持細胞高密度培養(yǎng)（細胞密度可穩(wěn)定達到 1.0×10? cells/mL 以上），細胞活力維持在 95% 以上，為大規(guī)模細胞培養(yǎng)及蛋白生產(chǎn)提供保障。

• 兼容蛋白表達系統(tǒng)，實用性強：兼容桿狀病毒載體表達系統(tǒng)（Baculovirus Expression Vector System, BEVS），能為重組基因的高效轉(zhuǎn)錄、翻譯提供充足營養(yǎng)支持，可顯著提升重組蛋白的表達量與活性，適用于科研級及小規(guī)模生產(chǎn)級的重組蛋白制備實驗。

三、基礎(chǔ)參數(shù)

四、產(chǎn)品使用方法

（一）細胞馴化與傳代

1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)條件

2. 直接馴化法（適用于多數(shù)常規(guī)細胞株）

3. 漸進式馴化法（適用于敏感細胞株或生長狀態(tài)不穩(wěn)定的細胞）

1. 細胞預(yù)處理：先將凍存或復(fù)蘇后的細胞在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇，并連續(xù)傳代 2-3 次，確保細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定（活力 ≥95%），且處于對數(shù)生長期。

2. 梯度馴化：配制系列比例的混合培養(yǎng)基（原培養(yǎng)基 + CW003 培養(yǎng)基），按 CW003 培養(yǎng)基比例從 25%→50%→75%→90% 逐步提升，每個比例梯度下傳代培養(yǎng) 2 代（每 48 h 傳代一次），傳代時初始細胞密度控制在 0.8-1.1×10? cells/mL，期間密切觀察細胞形態(tài)、活力及增殖情況（建議每日計數(shù) 1 次）。

3. 適應(yīng)：當(dāng)細胞在含 90% CW003 培養(yǎng)基的體系中生長穩(wěn)定（活力 ≥90%，增殖正常）后，即可將細胞傳代至 100% CW003 培養(yǎng)基中。連續(xù)培養(yǎng) 3-4 代，若細胞始終保持穩(wěn)定生長狀態(tài)，說明已適應(yīng) CW003 培養(yǎng)基，可用于后續(xù)實驗。

（二）細胞復(fù)蘇

1. 預(yù)熱培養(yǎng)基：提前將 CW003 培養(yǎng)基置于 37℃ 水浴鍋中預(yù)熱至 37℃ 備用。

2. 快速解凍：從液氮罐或 -80℃ 冰箱中迅速取出凍存管，立即放入 37℃ 水浴鍋中，輕輕晃動凍存管（避免劇烈震蕩損傷細胞），確保凍存管均勻受熱，在 120 s 內(nèi)完成解凍，至凍存管內(nèi)僅剩余少量小塊冰晶（融化前取出，可減少細胞受熱損傷）。

3. 無菌處理：在生物安全柜內(nèi)，用 75% 乙醇擦拭凍存管外壁進行消毒，待乙醇揮發(fā)后，緩慢打開凍存管蓋子（釋放管內(nèi)壓力，避免液體噴濺），將融化的細胞懸液全部轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入 10 mL 預(yù)熱 CW003 培養(yǎng)基的無菌離心管中。

4. 離心換液：將離心管置于離心機中，以 175 g 的離心力離心 5 min，棄去上清液（去除凍存液中的 DMSO 及死細胞）。向離心管中加入 20-30 mL 預(yù)熱的新鮮 CW003 培養(yǎng)基，用無菌吸管輕輕吹打細胞沉淀，使細胞均勻重懸（吹打動作輕柔，避免產(chǎn)生過多氣泡損傷細胞）。

5. 接種培養(yǎng)：將重懸后的細胞懸液轉(zhuǎn)移至合適規(guī)格的搖瓶中（建議裝液量為搖瓶容積的 1/4-1/3，保證充足氧氣供應(yīng)），置于 27℃、110-130 rpm 搖床中培養(yǎng)，24 h 后觀察細胞貼壁（若為貼壁培養(yǎng)）或懸浮生長情況，并進行細胞計數(shù)及活力檢測。

（三）細胞凍存

1. 細胞選擇：選擇處于對數(shù)生長期、生長狀態(tài)良好、活力 ≥98% 的細胞進行凍存（對數(shù)生長期細胞增殖能力強，抗損傷能力強，復(fù)蘇后存活率高）。

2. 準(zhǔn)備工作：提前計算凍存管數(shù)量及所需凍存液體積；將程序降溫凍存盒加入適量異丙醇（確保浸沒內(nèi)部金屬支架），置于 4℃ 冰箱預(yù)冷備用；凍存管做好標(biāo)簽標(biāo)注，注明細胞名稱、凍存日期、代次等信息。

3. 凍存密度確定：常規(guī)凍存密度為 2.5-3.5×10? cells/mL/支，若細胞活力高或后續(xù)需大量復(fù)蘇，可調(diào)整為 1.0-2.0×10? cells/mL/支，確保復(fù)蘇后初始細胞密度適宜生長。

4. 凍存液配制：按“45% 新鮮 CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細胞原培養(yǎng)上清 + 10% DMSO（二甲基亞砜）"的比例配制凍存液，充分混勻后置于 4℃ 冰箱預(yù)冷（DMSO 需選用細胞培養(yǎng)級，避免雜質(zhì)污染；凍存液建議當(dāng)天配制當(dāng)天使用，防止成分變質(zhì)）。

5. 細胞收集與重懸：將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的細胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，以 175 g 的離心力離心 5 min，棄去上清液。向離心管中加入適量預(yù)冷的凍存液，輕輕吹打細胞沉淀，使細胞均勻重懸（避免劇烈吹打?qū)е录毎屏眩?/p>

6. 分裝凍存：將重懸后的細胞懸液迅速分裝至預(yù)冷的無菌凍存管中，每支凍存管分裝 1 mL，立即擰緊凍存管蓋子（確保密封良好，防止液氮滲入）。

7. 梯度降溫與長期保存：將分裝完成的凍存管放入預(yù)冷的程序降溫凍存盒中，置于 -80℃ 冰箱中過夜（程序降溫凍存盒可實現(xiàn)每分鐘 1℃ 的降溫速率，模擬自然降溫過程，減少細胞內(nèi)冰晶形成）。次日，確認凍存管無破損后，將其轉(zhuǎn)移至液氮罐的氣相或液相中進行長期保存，并做好液氮罐內(nèi)存儲位置的記錄。

五、注意事項

• 培養(yǎng)基使用前需檢查外觀，若出現(xiàn)渾濁、沉淀、絮狀物或顏色異常（如變黃、變紫），說明可能已污染或變質(zhì)，禁止使用。

• 培養(yǎng)基開封后應(yīng)盡快使用，若需短期存放，需密封后置于 2-8℃ 避光保存，存放時間不超過 1 個月，且期間避免反復(fù)凍融。

• 細胞培養(yǎng)及相關(guān)操作（復(fù)蘇、凍存、傳代）均需在無菌環(huán)境下進行，嚴(yán)格遵循生物安全柜操作規(guī)程，避免細胞污染。

• DMSO 具有一定的毒性，操作凍存液時需佩戴手套、口罩等防護用品，避免直接接觸皮膚和黏膜；若不慎接觸，需立即用大量清水沖洗。

• 程序降溫凍存盒中的異丙醇需定期更換（建議每使用 5-6 次更換一次），確保降溫效果穩(wěn)定；凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐時，需避免溫差過大導(dǎo)致凍存管破裂。

• 不同細胞株的生長特性存在差異，使用本培養(yǎng)基時，建議進行小體積預(yù)實驗，優(yōu)化培養(yǎng)條件（如轉(zhuǎn)速、傳代密度），再進行大規(guī)模培養(yǎng)。