MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞/種屬鑒定
一、細(xì)胞特性
- 來源：結(jié)腸癌
- 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
- 含量：>1x106 個(gè)/mL
- 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
- 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、運(yùn)輸和保存：
使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞MC38用途：僅供科研使用。
四、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
- 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，80%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%。
- 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
- 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
2、細(xì)胞處理：
- 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
- 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
- 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
- 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
- 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
- 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
4、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量yi酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
五、鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：
1、原代細(xì)胞服務(wù)：
- 各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
- 多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
- 原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
- 原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)
2、細(xì)胞系服務(wù)：
- 細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說明書
- 細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
- 細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長因子、試劑等
3、iPS細(xì)胞服務(wù)：
- iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
- iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
- iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
- 新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估
4、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等
會(huì)員.png)
8
化工儀器網(wǎng)