在人體對抗病原微生物入侵的復(fù)雜防御網(wǎng)絡(luò)中，中性粒細胞扮演著“di一響應(yīng)者"的關(guān)鍵角色。其zui*的wu器之一，便是在吞噬過程中釋放大量活性氧自由基（ROS）的“呼吸爆發(fā)"現(xiàn)象。這一過程不僅是先天免疫的核心環(huán)節(jié)，其功能狀態(tài)更是評估機體免疫能力、診斷特定疾病及評價藥物效果的重要窗口。基于二氫若丹明123（DHR123）與流式細胞術(shù)的檢測試劑盒，已成為定量解析這一生命過程的標準化、高靈敏度工具。
中性粒細胞在識別并吞噬細菌、真菌等病原體后，細胞膜上的NADPH氧化酶復(fù)合體會被迅速激活。該酶催化氧氣轉(zhuǎn)化為超氧陰離子，進而引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)，生成過氧hua氫、次氯酸等具有強效殺菌作用的活性氧物質(zhì)。這一耗氧量急劇增加的生化過程，被稱為“呼吸爆發(fā)"或“氧化爆發(fā)"。它是機體氧依賴性殺傷病原體的主要機制。
現(xiàn)代檢測試劑盒的核心是構(gòu)建一個高效的“熒光報告系統(tǒng)"。其通用工作原理如下：
刺激激活：使用佛波酯（PMA）等強力刺激劑，在體外模擬病原體信號，直接、穩(wěn)定地激活中性粒細胞內(nèi)的NADPH氧化酶，誘發(fā)呼吸爆發(fā)。
熒光轉(zhuǎn)化：試劑盒提供的DHR123是一種可穿透細胞膜的惰性熒光染料。當呼吸爆發(fā)產(chǎn)生ROS時，DHR123被不可逆地氧化，轉(zhuǎn)化為發(fā)出強綠色熒光的物質(zhì)——若丹明123。
定量檢測：利用流式細胞儀，可以對單個細胞進行分析。細胞的熒光強度與細胞內(nèi)產(chǎn)生的ROS量成正比，通過測量中性粒細胞群體的平均熒光強度，即可對呼吸爆發(fā)的水平進行精確定量。
該方法直接、靈敏，且能在全血樣本中特異性分析中性粒細胞，無需復(fù)雜的細胞分離純化步驟，最da限度地保持了細胞的功能狀態(tài)。
該技術(shù)為免疫學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究提供了*的工具，其應(yīng)用貫穿于理解生理機制、揭示病理改變和開發(fā)干預(yù)策略的全過程。
這是檢測呼吸爆發(fā)功能zui經(jīng)典的臨床應(yīng)用。慢性肉芽腫?。–GD）是一種由于NADPH氧化酶基因突變導(dǎo)致呼吸爆發(fā)功能缺陷的遺傳性免疫缺陷病。使用該試劑盒進行檢測，CGD患者的中性粒細胞在PMA刺激后，熒光強度顯著低于健康對照，甚至wan全無響應(yīng)，從而成為診斷和分型的關(guān)鍵依據(jù)。相關(guān)檢測流程已在部分專業(yè)醫(yī)療機構(gòu)的實驗室中作為診斷項目開展。
在細菌或真菌感染模型中，研究人員通過比較感染個體與健康個體中性粒細胞的呼吸爆發(fā)能力，可以評估機體天然免疫系統(tǒng)的激活狀態(tài)和應(yīng)答效能。此外，該方法也廣泛用于研究膿毒癥、急性肺損傷等嚴重炎癥狀態(tài)下，中性粒細胞功能的亢進或失調(diào)。
在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病中，研究者利用該技術(shù)探究異常激活的中性粒細胞如何通過過量ROS釋放加劇組織損傷。同樣，在動脈粥樣硬化、糖尿病并發(fā)癥等慢性炎癥相關(guān)疾病中，呼吸爆發(fā)的水平也與疾病的進展密切相關(guān)。
腫瘤相關(guān)中性粒細胞（TAN）在腫瘤微環(huán)境中扮演著復(fù)雜角色。檢測其呼吸爆發(fā)功能，有助于區(qū)分具有抗腫瘤活性的N1表型和促進腫瘤進展的N2表型，為理解腫瘤免疫逃逸機制和開發(fā)新療法提供線索。
該技術(shù)是評價免疫調(diào)節(jié)藥物、抗氧化劑或新型抗菌藥物效應(yīng)的理想平臺。例如，在藥物研發(fā)中：
免疫增強：評估藥物能否恢復(fù)或增強免疫低下模型（如化療后）中性粒細胞的功能。
抗炎治療：測試抗炎藥物能否抑制病理狀態(tài)下中性粒細胞過度的、具有破壞性的ROS釋放。
中藥藥理：研究天然產(chǎn)物提取物對免疫細胞功能的調(diào)節(jié)作用。
值得注意的是，由于該檢測方法的原理基于保守的NADPH氧化酶活性，因此它不僅適用于人類樣本，還可廣泛應(yīng)用于小鼠、大鼠、兔、犬、牛乃至豬等多種實驗動物和畜牧動物的免疫學(xué)研究。這為從動物模型到人類疾病的轉(zhuǎn)化研究搭建了橋梁。
一個嚴謹?shù)暮粑l(fā)檢測實驗，需在以下幾個環(huán)節(jié)進行周密設(shè)計：
PMA是zui常用的強效、非特異性刺激劑，能提供穩(wěn)定、均一的激活信號。但對于更接近生理狀態(tài)的研究，可以選擇其他刺激物：
| 刺激劑類型 | 作用機制 | 應(yīng)用特點 |
|---|---|---|
| PMA (佛波酯) | 直接激活蛋白激酶C，強力觸發(fā)呼吸爆發(fā) | 標準陽性對照，信號強，重復(fù)性好 |
| fMLP (甲酰肽) | 模擬細菌多肽，通過G蛋白偶聯(lián)受體激活細胞 | 更接近生理性趨化和激活路徑 |
| 免疫復(fù)合物/補體 | 通過Fc受體或補體受體激活 | 研究特異性抗體介導(dǎo)的細胞功能 |
表：常用中性粒細胞刺激劑對比
典型的實驗步驟（以全血樣本為例）包括：
采集與抗凝：使用肝素鈉或ACD-A等抗凝管采集新鮮全血。
刺激與孵育：取少量抗凝全血，加入刺激劑（如PMA），于37°C孵育一段時間（通常15-45分鐘）以激活細胞。
探針加載：加入DHR123，繼續(xù)避光孵育。此時激活細胞產(chǎn)生的ROS將DHR123氧化為熒光物質(zhì)。
紅細胞裂解與固定：加入裂解液去除紅細胞，并用緩沖液洗滌細胞，以終止反應(yīng)并減少背景。
上機分析：使用流式細胞儀采集數(shù)據(jù)。通常通過設(shè)置前向角/側(cè)向角散點圖圈定粒細胞群，再分析該群細胞在FL1（綠色熒光）通道的平均熒光強度或陽性細胞百分比。
嚴謹?shù)膶嶒灡仨氃O(shè)置以下對照：
未刺激對照：只加DHR123，不加刺激劑，用于檢測基礎(chǔ)ROS水平。
完quan激活對照：加PMA和DHR123，作為最da呼吸爆發(fā)能力的參考。
儀器補償對照：如進行多色流式分析，需使用單陽樣本調(diào)節(jié)熒光補償。
高靈敏度與單細胞水平：流式細胞術(shù)可在單細胞水平進行檢測，揭示細胞群體的異質(zhì)性。
快速高效：整個流程可在數(shù)小時內(nèi)完成，適合批量樣本分析。
樣本需求量少：僅需微量全血（可低至50微升），尤其適用于兒科患者或小動物實驗。
定量客觀：熒光強度是連續(xù)的數(shù)值變量，便于進行統(tǒng)計學(xué)分析和比較。
設(shè)備依賴：必須配備流式細胞儀。
功能“快照"：檢測的是特定時間點的ROS產(chǎn)生能力，不能直接反映持續(xù)殺傷的動態(tài)過程。
操作影響：樣本運輸時間、溫度、抗凝劑類型（推薦ACD-A或肝素）等均可影響結(jié)果，需嚴格標準化操作流程。
探針特異性：DHR123主要檢測過氧hua氫、次氯酸等氧化產(chǎn)物，對超氧陰離子的檢測能力有限。
中性粒細胞呼吸爆發(fā)檢測試劑盒作為連接基礎(chǔ)免疫學(xué)與臨床研究的精準工具，其價值已得到充分驗證。隨著技術(shù)的發(fā)展，例如將該方法與更復(fù)雜的多色免疫表型分析、磷酸化流式等技術(shù)結(jié)合，我們有望在單次實驗中同時獲得細胞的功能狀態(tài)、分型及信號通路激活信息，從而在腫瘤免疫治療、自身免疫病精準分型、新型疫苗佐劑評價等領(lǐng)域，更深入地解碼中性粒細胞這一先天免疫衛(wèi)士的復(fù)雜功能網(wǎng)絡(luò)，為人類健康帶來新的突破。
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
|---|---|---|
| abs50002 | 中性粒細胞呼吸爆發(fā)檢測試劑盒 | 25T/50T/100T |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：十da試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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