7-氨基放線菌素D，簡稱7-AAD，是一種源自放線菌素D的熒光核酸嵌入染料，其分子結(jié)構(gòu)由一個環(huán)狀多肽與芳香基團構(gòu)成，分子量為1270.45。作為一種經(jīng)典的細胞生物學(xué)研究工具，7-AAD的核心特征使其在復(fù)雜的多參數(shù)分析中占據(jù)獨特地位。
7-AAD能夠特異性嵌入雙鏈DNA的GC堿基對之間，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種結(jié)合模式使其對DNA具有高親和力和選擇性，而對RNA的親和力較低，從而確保了染色的特異性。此外，7-AAD是一種膜非通透性染料，這意味著它無法穿過具有完整生物活性的細胞質(zhì)膜，只能在細胞膜完整性受損（如細胞壞死、晚期凋亡）或經(jīng)過固定、透化處理后進入細胞核并與DNA結(jié)合。
7-AAD/DNA復(fù)合物的最jia激發(fā)波長（Ex）約為546 nm，最da發(fā)射波長（Em）約為647 nm，位于光譜的遠紅區(qū)域。這一特性是其在多色實驗中價值的關(guān)鍵。它通?？捎闪魇郊毎麅x上常見的488 nm激光器有效激發(fā)，并在流式細胞儀的FL3通道（常用670/14 nm或類似帶通濾光片）進行檢測。
為了更清晰地理解7-AAD在同類染料中的定位，下表將其與常用的碘化丙啶（PI）和DAPI進行了對比：
| 特性 | 7-AAD (7-氨基放線菌素 D) | PI (碘化丙啶) | DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚) |
|---|---|---|---|
| 膜通透性 | 否（僅進入膜受損細胞） | 否（僅進入膜受損細胞） | 是（可穿透活細胞膜） |
| 染色原理 | 嵌入DNA雙鏈的GC堿基對 | 嵌入雙鏈DNA | 小溝結(jié)合雙鏈DNA |
| 主要激發(fā)/發(fā)射波長 | Ex: ~546 nm, Em: ~647 nm | Ex: 488 nm, Em: ~617 nm | Ex: 355/405 nm, Em: ~450 nm |
| 主要檢測通道 | 流式FL3通道 | 流式FL2通道 | 流式紫光/紫外通道 |
| 多色兼容性 | 優(yōu)，與FITC、PE等光譜重疊小 | 中，與FITC、PE有一定光譜重疊 | 良，常用于復(fù)染，與多數(shù)可見光染料不沖突 |
| 主要應(yīng)用側(cè)重 | 多色流式中的死細胞排除、活力分析 | 細胞周期分析、凋亡檢測（與Annexin V聯(lián)用） | 細胞核定位、顯微成像、DNA定量 |
基于上述特性，7-AAD在生物醫(yī)學(xué)研究中的核心價值體現(xiàn)在兩個方面：一是作為多色熒光分析中的高兼容性死細胞指示劑；二是作為固定透化后細胞的DNA標(biāo)記物，用于更深入的分析。
這是7-AAD最guang泛的應(yīng)用場景。在流式細胞術(shù)實驗中，死細胞會非特異性結(jié)合抗體，產(chǎn)生假陽性信號，并增加背景熒光，干擾對目標(biāo)細胞群的準(zhǔn)確分析。使用7-AAD可以在分析前將這群細胞“標(biāo)記"并排除。
操作流程：通常在細胞完成所有表面抗體染色并洗滌后，在上機前加入7-AAD（常用終濃度1-10 μM），避光孵育5-15分鐘，無需洗滌直接上機檢測。
數(shù)據(jù)分析：在流式散點圖中，7-AAD陰性（7-AAD?）的細胞群被視為活細胞或早期凋亡細胞（膜完整），而7-AAD陽性（7-AAD?）的細胞群則代表膜完整性喪失的死細胞（晚期凋亡或壞死細胞）。這在免疫學(xué)研究、腫瘤微環(huán)境分析、干細胞分選等涉及復(fù)雜細胞混合群體的實驗中至關(guān)重要。
對已經(jīng)固定并用乙醇或去垢劑透化的細胞，7-AAD可以均勻地結(jié)合所有細胞的DNA。通過流式細胞儀測量每個細胞結(jié)合的7-AAD熒光強度（即DNA含量），可以將細胞周期區(qū)分為G0/G1期（二倍體DNA含量）、S期（DNA正在合成）和G2/M期（四倍體DNA含量）。雖然在此應(yīng)用中PI更為傳統(tǒng)，但7-AAD的遠紅發(fā)射特性使其在需要同時檢測其他熒光標(biāo)記（如用FITC標(biāo)記的細胞周期相關(guān)蛋白）的多色實驗中更具優(yōu)勢。
由于7-AAD對DNA的GC堿基對有選擇性結(jié)合偏好，它在與染色體結(jié)合時能產(chǎn)生特異的帶型，可用于染色體顯帶研究。此外，在熒光顯微鏡檢查中，7-AAD可作為細胞核復(fù)染劑，清晰標(biāo)記細胞核的位置，常與其他熒光探針（如標(biāo)記細胞骨架或特定細胞器的探針）聯(lián)合使用，用于多色熒光成像分析。
儲備液配制：將粉末狀7-AAD溶于無水DMSO，配制成1-10 mM的儲備液，分裝后-20℃避光保存，通常可穩(wěn)定儲存6個月。
染色步驟：
制備單細胞懸液，完成其他免疫熒光染色及洗滌步驟。
用合適的緩沖液（如PBS或?qū)Ｓ萌旧彌_液）重懸細胞。
加入7-AAD至終濃度（通常為1-5 μM），輕輕渦旋混勻。
避光，在室溫（或2-8℃）下孵育5-20分鐘。具體時間需根據(jù)細胞類型和濃度進行優(yōu)化，但過長時間孵育可能導(dǎo)致活細胞攝取增加。
（可選）對于活力分析，建議孵育后盡快（1小時內(nèi)）上機檢測，無需洗滌。對于固定后的DNA染色，可按需進行洗滌。
激光與濾光片：確認您的流式細胞儀配備488 nm藍色激光，并設(shè)有用于檢測遠紅/紅外熒光的濾光片組合（如670/14 nm帶通或660/20 nm帶通）。
染料搭配：7-AAD與488 nm激發(fā)的常用熒光染料如FITC（發(fā)射峰~525 nm）和 PE（發(fā)射峰~575 nm） 的光譜重疊極小，因此可以非常wan美地與它們搭配，組成雙色或三色方案。在設(shè)計更復(fù)雜的多色面板時，仍需利用儀器的光譜查看功能或補償矩陣，檢查其與APC、Alexa Fluor 647等發(fā)射峰也在遠紅區(qū)染料的潛在重疊。
濃度與時間滴定：最jia的染色濃度和孵育時間因細胞類型、細胞密度和實驗條件而異。建議初次實驗時設(shè)置濃度梯度（例如0.5, 1, 2, 5 μM）和時間梯度進行優(yōu)化，目標(biāo)是獲得死細胞群與活細胞群之間最清晰的分離。
樣本處理：避免使用含有EDTA的胰酶過長時間消化細胞，這可能會損傷細胞膜，導(dǎo)致假陽性染色。處理樣本時動作輕柔，減少機械損傷。
對照設(shè)置：必須設(shè)置未染色細胞對照（用于調(diào)節(jié)流式儀器的電壓和設(shè)定陰性邊界）和單陽對照（特別是7-AAD單染管，用于準(zhǔn)確計算多色實驗中的熒光補償）。
安全與保存：7-AAD是一種潛在的致癌物，操作時應(yīng)佩戴手套、實驗服和護目鏡。染料對光敏感，所有步驟均需避光。配制好的工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，避免反復(fù)凍融。
7-AAD憑借其獨特的膜不通透性和位于遠紅區(qū)的發(fā)射光譜，在當(dāng)代細胞功能研究中扮演著不可替代的角色。它不僅是多參數(shù)流式細胞術(shù)中排除死細胞干擾、確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的“守門員"，也是進行固定細胞DNA含量分析和多色顯微成像的有力工具。隨著多色分析技術(shù)日益成為細胞生物學(xué)和免疫學(xué)研究的主流，7-AAD因其卓yue的光譜兼容性，其應(yīng)用價值將愈發(fā)凸顯。
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
|---|---|---|
| abs9104 | 7-AAD | 1mg |
| abs47039011 | 7-AAD溶液 | 1mL×2 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：十da試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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