糖類分析柱的分離機(jī)制主要基于以下兩種原理:
配體交換/配位作用:這是最主流的機(jī)制。填料通常是聚合樹脂基質(zhì),表面鍵合有帶正電荷的金屬離子(如 Ca²?、Pb²?、Na? 等)。糖分子上的羥基帶有微弱的負(fù)電荷,會(huì)與金屬離子發(fā)生配位結(jié)合,不同糖分子的結(jié)合能力差異從而實(shí)現(xiàn)分離。
尺寸排阻:部分糖柱結(jié)合了尺寸排阻的原理,根據(jù)糖分子的大?。▎翁?、二糖、寡糖、多糖)進(jìn)行篩選分離。
使用注意事項(xiàng):
柱溫:糖柱必須80–85°C,低溫會(huì)導(dǎo)致端基異構(gòu)體峰分裂、定量失敗
過濾:樣品必須經(jīng)0.22μm濾膜過濾,糖柱極易被顆粒堵塞
保護(hù)柱:必須加同型號保護(hù)柱,每50–100次更換
純水流動(dòng)相:鈣型/鉛型柱要用純水,不能加有機(jī)溶劑或緩沖液
沖洗順序:水→20倍柱體積→純水保存(鈣型);稀酸→純水→保存(氫型)
專柱專用:糖柱不要與滅蠅胺、農(nóng)藥等項(xiàng)目混用,避免不可逆污染
禁止過夜留鹽:緩沖鹽留柱內(nèi)過夜會(huì)析出結(jié)晶堵死篩板
避免甲醇:糖類分析中甲醇可能產(chǎn)生干擾峰,流動(dòng)相用乙腈或不用有機(jī)相
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