間接法（測(cè)抗體）

雙抗體夾心法（測(cè)抗原）

競(jìng)爭(zhēng)法（測(cè)抗原）

抑制性測(cè)定法

1

包被抗原：用包被緩沖液稀釋抗原至zui適濃度（5～20μg/ml）各0.3ml加于微反應(yīng)板每個(gè)凹孔中,4℃過(guò)夜或37℃水浴2～3小時(shí),貯存冰箱

包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至zui適濃度（1～10μg /ml），每凹孔加0.3ml，4℃過(guò)夜，或37℃水浴3小時(shí)，貯存冰箱 

 
包被特異性抗體：

同左

 
包被抗原：

同左

 2

 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘

 同左

 同左

 同左

 3

 加被檢標(biāo)本：每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩沖液稀釋的被檢血清各0.2ml，37℃，作用1～2小時(shí)

 每凹孔加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的含抗原的被檢標(biāo)本，37℃作用1～2小時(shí)。

 分2組,a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原混合液0.2ml，另一組只加酶標(biāo)記抗原液0.2ml，37℃作用1～2小時(shí)。（混合液可作成不同稀釋度）。

 a組加參考抗體和被檢抗原混合液0.2ml，另一組加參考抗體與等量稀釋劑0.2ml，37℃作用1～2小時(shí)。

 4

 洗滌：重復(fù)2

 同左

 洗滌：同左

 洗滌

 5

 加入酶結(jié)合物：每凹孔加入稀釋緩沖液稀釋的酶結(jié)合物0.2ml。37℃作用1～2小時(shí)

 加入0.2ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液，37℃作用1～2小時(shí)或由預(yù)試實(shí)驗(yàn)確定作用時(shí)間。

 ——

 各加入0.2ml抗參考抗體的酶結(jié)合物37℃作用1～2小時(shí)。

 6

 洗滌：重復(fù)2

  同左

 ——

 洗滌

 7

 加入0.2ml底物溶液于每個(gè)凹孔,（O.P.D或O.T），室溫作用30分鐘（另作一空白對(duì)照，0.4ml底物加0.1ml終止劑）。

 同左

 同左

 同左

 8

 加終止劑：每凹孔加2M H₂SO₄或2M檸檬酸0.05ml。

 同左

 同左

 同左

 9

 觀察記錄結(jié)果：目測(cè)或用酶標(biāo)比色計(jì)測(cè)定（O.P.D用492nm）O.D值。

 同左

 用酶標(biāo)比色計(jì)測(cè)定a、b兩組O.D值，并求出a、b、O.D值的差數(shù)。

  同左