小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞（Mouse Renal Tubular Smooth Muscle Cells）是一種與腎臟功能密切相關(guān)的原代細(xì)胞。以下是關(guān)于它的詳細(xì)介紹：

一、組織來(lái)源

小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞分離自小鼠的腎組織，腎小管是與腎小囊壁層相連的細(xì)長(zhǎng)上皮性小管，包括近曲小管、髓袢和遠(yuǎn)曲小管等部分。

二、細(xì)胞形態(tài)

原代分離培養(yǎng) 3 天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中。2 周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。

三、生長(zhǎng)特性

屬于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，在培養(yǎng)時(shí)需要附著在培養(yǎng)器皿表面才能生長(zhǎng)增殖，通常在 37°C、5% CO?的環(huán)境中培養(yǎng)。

四、分子特征

高度表達(dá)α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白、鈣調(diào)蛋白等平滑肌特異性標(biāo)志物，這些標(biāo)志物可用于細(xì)胞的鑒定。

五、主要功能

參與腎小管的收縮與舒張，進(jìn)而調(diào)節(jié)腎臟的血流與尿液排泄，在維持機(jī)體體液平衡及酸堿平衡等方面發(fā)揮著重要作用。

六、應(yīng)用領(lǐng)域

廣泛應(yīng)用于腎臟生理學(xué)研究、血管生物學(xué)研究、腎臟疾病模型構(gòu)建、藥物篩選與毒性研究以及信號(hào)通路研究等領(lǐng)域，為腎臟疾病治療和藥物研發(fā)提供了有力支持。

七、培養(yǎng)與保存

一般使用專用培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，換液頻率為每 2-3 天一次。凍存條件為 90% FBS（胎牛血清）+10% DMSO（二甲基亞砜）。

八、小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法

這個(gè)問(wèn)題很關(guān)鍵，精準(zhǔn)指向了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的核心操作環(huán)節(jié)。小鼠腎小管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)主要遵循原代分離培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩大流程，核心是嚴(yán)格控制無(wú)菌環(huán)境與模擬體內(nèi)生長(zhǎng)條件。

（一）原代培養(yǎng)（從組織到單細(xì)胞）

原代培養(yǎng)是獲取目標(biāo)細(xì)胞的步，關(guān)鍵在于無(wú)菌操作和高效分離。

1、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備

動(dòng)物：選擇健康的 SPF 級(jí)小鼠，通常為 4-6 周齡。

試劑：PBS 緩沖液（含雙抗）、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液、腎小管平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基、75% 酒精。

器械：無(wú)菌手術(shù)剪、鑷子、培養(yǎng)皿、離心管、移液器。

2、組織獲取與處理

小鼠經(jīng)頸椎脫臼處死后，用 75% 酒精浸泡消毒 5 分鐘。

在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)，剪開腹腔取出雙側(cè)腎臟，放入含雙抗的 PBS 中清洗 3 次，去除表面血液和脂肪。

用手術(shù)剪將腎臟剪成 1mm3 左右的小塊，再次用 PBS 清洗至液體澄清。

3、細(xì)胞消化與分離

棄去 PBS，加入適量 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液，37°C 恒溫培養(yǎng)箱中消化 15-20 分鐘，期間每隔 5 分鐘輕輕搖晃一次。

當(dāng)組織塊邊緣出現(xiàn)模糊時(shí)，加入等量培養(yǎng)基終止消化，用移液器輕輕吹打 10-15 次，使細(xì)胞分散。

用 200 目細(xì)胞篩過(guò)濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，收集濾液至離心管。

4、細(xì)胞接種與培養(yǎng)

1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清液，加入培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至 1×10?-1×10?個(gè) /mL。

將細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)皿中，放入 37°C、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 小時(shí)后更換培養(yǎng)基，去除未貼壁細(xì)胞。

（二）傳代培養(yǎng)（維持細(xì)胞增殖）

當(dāng)原代細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿底面積的 80%-90% 時(shí)，需進(jìn)行傳代以避免細(xì)胞過(guò)度密集。

1、傳代前準(zhǔn)備

提前將培養(yǎng)基、PBS、胰蛋白酶 - EDTA 消化液置于 37°C 水浴鍋中預(yù)熱。

用 75% 酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面和培養(yǎng)皿表面，確保無(wú)菌環(huán)境。

2、細(xì)胞消化與收集

棄去培養(yǎng)皿中的舊培養(yǎng)基，用 PBS 輕輕沖洗細(xì)胞表面 2 次，去除殘留培養(yǎng)基。

加入適量胰蛋白酶 - EDTA 消化液，覆蓋細(xì)胞表面即可，37°C 培養(yǎng)箱中孵育 2-3 分鐘，顯微鏡下觀察到細(xì)胞間隙增大、形態(tài)變圓時(shí)，終止消化。

加入培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打細(xì)胞，使其從培養(yǎng)皿表面脫落，形成單細(xì)胞懸液，收集至離心管。

3、細(xì)胞接種與培養(yǎng)

1000rpm 離心 5 分鐘，棄去上清液，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

按照 1:2 或 1:3 的比例將細(xì)胞接種到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)充培養(yǎng)基至合適體積，放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)，2-3 天后更換培養(yǎng)基。

九、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

無(wú)菌控制：全程在超凈臺(tái)內(nèi)操作，器械和試劑需提前滅菌，避免細(xì)菌、真菌污染；操作人員需佩戴無(wú)菌手套、口罩，酒精消毒雙手。

消化時(shí)間：消化不足會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞難以脫落，消化過(guò)度會(huì)損傷細(xì)胞活性，需根據(jù)顯微鏡觀察結(jié)果靈活調(diào)整。

培養(yǎng)基選擇：必須使用腎小管平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基，不可用通用培養(yǎng)基替代，以保證細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和功能穩(wěn)定。

細(xì)胞鑒定：培養(yǎng)成功后，需通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè) α-SMA、Calponin 等特異性標(biāo)志物，確認(rèn)細(xì)胞純度，避免雜細(xì)胞污染。

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