小鼠成纖維細(xì)胞系是?來(lái)源于小鼠組織的貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞?，具有成纖維細(xì)胞形態(tài)，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥物篩選及干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。

一、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

NIH/3T3、BALB/3T3：DMEM（高糖）

L929：MEM 或 DMEM 都可

血清

10% 胎牛血清 FBS

雙抗

1% 青霉素/鏈霉素（可選，看實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣）

環(huán)境

37 ℃，5% CO?，飽和濕度

二、傳代要點(diǎn)（最容易出問(wèn)題的地方）

傳代時(shí)機(jī)

匯合度 70%–80% 傳代

不要等到長(zhǎng)滿、堆積，否則狀態(tài)會(huì)變差

消化

0.25% 胰酶 - EDTA

37 ℃消化 1–2 min，輕拍瓶壁細(xì)胞變圓即終止

終止消化

加含血清培養(yǎng)基中和胰酶

傳代比例

NIH/3T3：1:3 ~ 1:6

L929：1:3 ~ 1:5

三、細(xì)胞特性與注意事項(xiàng)

接觸抑制差異大

NIH/3T3、BALB/3T3：接觸抑制強(qiáng)，匯合后基本停止生長(zhǎng)

L929：接觸抑制弱，容易長(zhǎng)多層

形態(tài)判斷

健康：長(zhǎng)梭形、透亮、排列整齊

異常：胞質(zhì)顆粒多、邊緣模糊、大量漂浮 → 狀態(tài)差/污染

嚴(yán)禁過(guò)度消化

消化太久 → 細(xì)胞大量死亡、貼壁差、狀態(tài)崩

四、凍存 & 復(fù)蘇

凍存液

90% FBS + 10% DMSO

凍存

程序降溫盒 → -80 ℃ → 液氮

復(fù)蘇

37 ℃水浴快速融化

離心去 DMSO，再接種

五、污染與狀態(tài)維護(hù)

必查支原體

成纖維細(xì)胞很容易被支原體污染，影響增殖、轉(zhuǎn)染、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

避免反復(fù)過(guò)度傳代

高代次細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特性會(huì)變

不混用不同細(xì)胞系

交叉污染非常常見(jiàn)

六、簡(jiǎn)單總結(jié)（好記版）

高糖 DMEM + 10% FBS

70–80% 匯合傳代

輕消化、快終止

注意接觸抑制差異

嚴(yán)防支原體與交叉污染

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