一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介

1、產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞       

2、組織來(lái)源：眼組織

3、產(chǎn)品規(guī)格：25cm²培養(yǎng)瓶/5×10⁵cells

4、細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分離自眼組織；視網(wǎng)膜色素上皮為一層矮六角棱柱狀細(xì)胞，高8～10μm，寬12～18μm。細(xì)胞頂部伸出許多長(zhǎng)5～7μm的突起。在胚胎發(fā)生時(shí)，上皮基部和脈絡(luò)膜緊密連接，但頂部與視細(xì)胞連接不緊，故易在此發(fā)生視網(wǎng)膜剝離。電鏡觀察，細(xì)胞之間有緊密連接、中間連接和縫隙連接，基底部有胞膜內(nèi)褶和線(xiàn)粒體，故推測(cè)色素上皮有運(yùn)輸離子和屏障作用。胞核圓形，位于細(xì)胞基部。頂部胞質(zhì)含許多橢圓或圓形的黑色素顆粒和含板層碎片的殘余體?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)達(dá)，分布于色素顆粒和殘余體之間。有高爾基復(fù)合體、溶酶體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴。這些結(jié)構(gòu)反映了色素上皮的多種功能：①色素顆粒由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生，經(jīng)高爾基復(fù)合體轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)頂部。已知兩棲類(lèi)和魚(yú)類(lèi)受強(qiáng)光照射時(shí)，色素顆粒移入突起中；處于黑暗時(shí)，色素顆粒又回到胞質(zhì)中，這說(shuō)明色素上皮有吸收光和保護(hù)視細(xì)胞免受強(qiáng)光刺激的作用；②脂滴有集聚和貯存維生素A的作用，通過(guò)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的酯化與轉(zhuǎn)運(yùn)，參與視細(xì)胞合成視紫紅質(zhì)；③能吞噬脫落的視桿細(xì)胞外節(jié)膜盤(pán)，藉溶酶體酶水解消化，形成殘余體；④分泌蛋白多糖，粘合和維持視桿、視錐與色素上皮的相互位置關(guān)系，從而保證視紫紅質(zhì)的更新和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的傳遞。

本公司生產(chǎn)的小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞采用酶液消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells，細(xì)胞經(jīng)CK18免疫熒光鑒定；細(xì)胞純度可達(dá)85%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 

5、培養(yǎng)基信息：

培養(yǎng)基內(nèi)容：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、Penicillin、Streptomycin等；

為保證細(xì)胞體外培養(yǎng)最佳狀態(tài)我們推薦使用小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基。

二．細(xì)胞發(fā)貨及鑒定圖片

（1）細(xì)胞狀態(tài)照片：細(xì)胞發(fā)貨時(shí)發(fā)送至少3張細(xì)胞發(fā)貨前白光電子照片；

（2）細(xì)胞鑒定照片：提供一套細(xì)胞鑒定圖片（可用于發(fā)文章）；若要用于文章多套使用，需額外增加鑒定費(fèi)用，提供3套鑒定圖片；       

三．使用方法

在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞可傳1-2代左右；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

一、客戶(hù)收到細(xì)胞操作如下

1. 取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)；

2. 觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，細(xì)胞密度低于80%時(shí)，貼壁細(xì)胞倒去瓶中培養(yǎng)液，留下8ml作用繼續(xù)培養(yǎng)；細(xì)胞密度大于80%時(shí)，即可進(jìn)行傳代；

3. 吸出25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS洗滌3次；

4. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴2-3min左右；倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓，透亮?xí)r即可終止消化，加入雙倍充分培養(yǎng)液輕輕吹打細(xì)胞使其變成單細(xì)胞懸液；

5. 收集細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，觀察細(xì)胞沉淀；

6. 加入1ml的充分培養(yǎng)液，輕輕吹打成單細(xì)胞懸液，均勻分配至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，初次傳代建議按照1：2比例進(jìn)行。

7. 待細(xì)胞充分貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的充分培養(yǎng)基。

二、細(xì)胞凍存管復(fù)蘇

1. 提前室溫預(yù)熱培養(yǎng)基，將水浴鍋調(diào)至37℃；

2. 在超凈工作臺(tái)內(nèi)提前準(zhǔn)備好15ml離心管，并加入5ml的充分培養(yǎng)基；

3. 將凍存管快速放入水浴鍋中，不斷晃動(dòng)凍存管，直至管內(nèi)冰塊全部融化

4. 然后快速取出，噴灑酒精，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)；

5. 擰開(kāi)凍存管螺紋蓋，用移液槍將細(xì)胞懸液輕輕吸出，轉(zhuǎn)移至含5ml充分培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

6. 離心結(jié)束后，觀察有無(wú)細(xì)胞沉淀，將上清棄去，加入1ml新鮮的充分培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打成細(xì)胞懸液；將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，T25培養(yǎng)瓶建議培養(yǎng)基加入量5-7ml，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分散均勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

三、細(xì)胞凍存

1. 凍存條件：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO或者無(wú)血清凍存液

2. 保存條件：液氮存儲(chǔ)

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月；