在固有免疫與適應(yīng)性免疫調(diào)控、腫瘤免疫逃逸機制解析、新型疫苗研發(fā)及自身免疫性疾病、移植免疫相關(guān)研究中，樹突狀細胞（Dendritic Cells, DCs）作為機體功能最-完備的專職抗原呈遞細胞（Antigen-Presenting Cells, APCs），是介導(dǎo)免疫啟動、免疫活化與免疫耐受平衡的核心樞紐。依托經(jīng)典細胞因子誘導(dǎo)分化（Cytokine-induced Differentiation）體系實現(xiàn)的體外DC誘導(dǎo)分化（In vitro DC differentiation），是闡明免疫穩(wěn)態(tài)調(diào)控機制、構(gòu)建體外免疫疾病模型、開展DC疫苗研發(fā)與細胞免疫治療的核心技術(shù)基礎(chǔ)，也是當(dāng)前再生醫(yī)學(xué)與腫瘤免疫精準(zhǔn)干預(yù)領(lǐng)域的前沿研究熱點。IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，深耕藥物前端試劑研發(fā)，為廣大科研工作者提供一站式體外DC誘導(dǎo)分化解決方案，有效解決傳統(tǒng)實驗分化低效、功能缺陷、批次不穩(wěn)等核心問題，全-方位助力免疫前沿研究與臨床轉(zhuǎn)化突破。

01    CD14+單核細胞介紹

CD14+單核細胞（CD14+ Monocytes）是人體骨髓、外周血來源的經(jīng)典高可塑性髓系祖細胞，也是體外髓系免疫細胞定向分化的核心種子細胞。區(qū)別于終末分化的免疫細胞，原代單核細胞（Primary CD14+ Monocytes）具備極-強的譜系分化可塑性，可在不同細胞因子微環(huán)境誘導(dǎo)下，定向分化為兩種科研、臨床應(yīng)用最-廣泛的功能細胞：樹突狀細胞（Dendritic Cells, DCs）與巨噬細胞（Macrophages）。其細胞純度、活性及表型穩(wěn)態(tài)，直接決定兩類細胞的分化效率、表型成熟度與免疫功能完整性，是髓系免疫細胞體外建模的核心質(zhì)控基礎(chǔ)。

作為多功能髓系前體細胞，CD14+ Monocytes不會向淋巴細胞、粒細胞、紅細胞等譜系分化，僅特異性定向分化為髓系抗原呈遞細胞與吞噬功能細胞，是免疫炎癥機制、腫瘤免疫、組織修復(fù)研究的核心工具細胞，其核心生物學(xué)作用貫穿分化、成熟、功能調(diào)控全過程。

CD14+ Monocytes的分化命運完-全依賴體外細胞因子誘導(dǎo)微環(huán)境，不同細胞因子組合可精準(zhǔn)啟動不同譜系分化程序，形成功能、形態(tài)、表型完-全差異化的成熟細胞，也是目前體外標(biāo)準(zhǔn)化制備mo-DCs、mo-Macrophages的經(jīng)典技術(shù)體系。

02    樹突狀細胞（DCs）的重要性

樹突狀細胞(dendritic cell, DC)，是由美國科學(xué)家Steinman 和Cohn 1973年在小鼠脾臟中發(fā)現(xiàn)的一種細胞，因其細胞膜伸出許多類似于神經(jīng)細胞的樹突故而得名。根據(jù)其來源、表型及分泌的細胞因子不同，DC可分為髓系DC和淋巴系DC兩類。兩類DC均起源于體內(nèi)的多能造血干細胞，但它們各自的前體細胞不同。髓系DC的前體是外周血中的單核細胞，與單核細胞及粒細胞有共同祖先；而淋巴系DC的前體是漿細胞樣干細胞，與T細胞、NK細胞有共同祖先。樹突狀細胞是目前所知的功能最-強的抗原提呈細胞，它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC（immature Dendritic Cells, iDCs）具有較強的遷移能力，可表達MHCⅠ/Ⅱ類分子、 IgGFc 受體（FcγR）、C3b 受體(C3bR)和某些Toll 樣受體如TLR2、TLR4 及TLR9。未成熟DC 攝取、加工處理抗原能力強，而提呈抗原激發(fā)免疫應(yīng)答能力弱；成熟DC（mature Dendritic Cells, mDCs）表面特征性標(biāo)志為CD1a、CD11c 和CD83，可高表達MHC-Ⅱ/Ⅰ類分子和共刺激分子（如B7 和ICAM），其攝取、加工處理抗原能力弱，而提呈抗原、啟動免疫應(yīng)答能力強。

因此，當(dāng)實驗核心圍繞抗原呈遞、特異性免疫激活、適應(yīng)性免疫應(yīng)答展開時，必須選擇GM-CSF/IL-4誘導(dǎo)的DC分化體系。DCs作為唯-一可激活初始T細胞的專職抗原呈遞細胞（Antigen-Presenting Cells, APCs），核心價值是搭建固有免疫與適應(yīng)性免疫的橋梁，適用于需要研究“抗原識別-信號呈遞-T細胞活化”完整通路的實驗，是DC疫苗、腫瘤特異性免疫、移植免疫、自身免疫病免疫激活機制研究的唯-一適配模型，具備不可替代的科研與臨床轉(zhuǎn)化價值。

①　雙向調(diào)控免疫應(yīng)答，維持機體免疫穩(wěn)態(tài)

未成熟DC細胞（immature Dendritic Cells, iDCs）主要定位于外周組織，以高效識別、攝取、加工外源性抗原與內(nèi)源性異?？乖瓰楹诵墓δ?；當(dāng)受到病原體相關(guān)分子模式、炎癥因子等刺激后，可快速啟動成熟程序，高表達MHC-I、MHC-II類分子及CD80、CD86、CD40等共刺激分子與黏附分子，將抗原肽-MHC復(fù)合物呈遞至T細胞受體，有效激活CD4+、CD8+T細胞，啟動特異性體液免疫與細胞免疫應(yīng)答，完成高效免疫激活。同時，DC細胞可通過調(diào)控Treg細胞分化參與免疫耐受構(gòu)建，動態(tài)平衡機體免疫活化與免疫抑制狀態(tài)，維持免疫穩(wěn)態(tài)。

②　支撐多領(lǐng)域前沿免疫研究

DC細胞是免疫機制研究的核心工具細胞，依托成熟的DC細胞誘導(dǎo)分化體外（In vitro DC differentiation）模型，可廣泛應(yīng)用于腫瘤免疫逃逸機制解析、新型抗感染疫苗研發(fā)、CAR-T細胞聯(lián)合免疫治療、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫病發(fā)病機制研究，以及器官-移植免疫排斥調(diào)控等前沿領(lǐng)域，是解析免疫激活、免疫紊亂、免疫耐受分子機制的核心體外研究載體。

③　臨床細胞治療與DC疫苗核心載體

在臨床轉(zhuǎn)化領(lǐng)域，DC細胞是腫瘤個體化免疫治療的核心載體，DC疫苗已成為實體腫瘤與血液腫瘤輔助治療的重要研究方向。通過體外標(biāo)準(zhǔn)化細胞因子誘導(dǎo)實現(xiàn)單核細胞向功能性DC的定向分化，結(jié)合抗原負載、功能成熟修飾制備的特異性DC疫苗，可精準(zhǔn)遞呈腫瘤抗原，激活機體系統(tǒng)性抗腫瘤免疫應(yīng)答，在肺癌、肝癌、淋巴瘤等惡性腫瘤的免疫治療中展現(xiàn)出優(yōu)異的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

03    IPHASE CD14單核細胞DC細胞誘導(dǎo)分化方案

基于DC細胞不可替代的科研與臨床轉(zhuǎn)化價值，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，依托多年原代免疫細胞研發(fā)與體外誘導(dǎo)體系優(yōu)化經(jīng)驗，構(gòu)建了標(biāo)準(zhǔn)化、高穩(wěn)定性、高可復(fù)刻性的CD14單核細胞定向誘導(dǎo)DC細胞技術(shù)體系。該體系基于經(jīng)典GM-CSF/IL-4細胞因子誘導(dǎo)通路優(yōu)化配比，規(guī)避傳統(tǒng)實驗分化不均、成熟度不足、批次差異大等痛點，可穩(wěn)定實現(xiàn)原代單核細胞向成熟功能性DC的高效分化，適配基礎(chǔ)免疫機制研究、腫瘤免疫藥物篩選、DC疫苗研發(fā)及細胞治療研發(fā)等多場景科研需求。

IPHASE技術(shù)人員以5000萬凍存人PBMC為分選起點，搭配IPHASE免疫細胞復(fù)蘇培養(yǎng)基（Cat NO. 072008.12）進行復(fù)蘇，活率95%，后經(jīng)過人單核細胞陰選試劑盒（Cat NO. 071A205.11）分選CD14+單核細胞，最終分得人CD14+單核細胞400萬，且純度為90%，然后將細胞以50萬/mL接種在T25培養(yǎng)瓶中進行誘導(dǎo)準(zhǔn)備。準(zhǔn)備好的人CD14+單核細胞，搭配IPHASE人DC細胞誘導(dǎo)分化試劑盒（Cat NO. 075003.11）進行體外DC誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試驗，期間每2天更換一次分化培養(yǎng)基。培養(yǎng)至第7天觀察到細胞出現(xiàn)”半貼壁、海膽狀“，此時即為未成熟樹突狀細胞（immature Dendritic Cells, iDCs）；隨后IPHASE技術(shù)人員進一步添加1EU/mL LPS 以進行成熟誘導(dǎo)，3天后觀察到細胞恢復(fù)成”懸浮、展翅狀“，說明IPHASE技術(shù)人員成功收獲成熟樹突狀細胞（mature Dendritic Cells, mDCs）。

此外，IPHASE技術(shù)人員進一步以PBMC為對照，輔以不同marker進行標(biāo)記，流式檢測證明了IPHASE iDC細胞誘導(dǎo)分化成功！

Keywords：CD14+單核細胞；單核細胞；樹突狀細胞；未成熟樹突狀細胞；成熟樹突狀細胞；體外DC誘導(dǎo)分化；抗原呈遞細胞；細胞因子誘導(dǎo)分化；原代單核細胞；CD14+ Monocytes；Monocytes; Dendritic Cells, DCs; immature Dendritic Cells, iDCs; mature Dendritic Cells, mDCs；In vitro DC differentiation; Antigen-Presenting Cells, APCs; Cytokine-induced Differentiation; Primary CD14+ Monocytes;