一、認(rèn)識(shí)生物安全柜

1. 生物安全柜概念：

簡(jiǎn)單點(diǎn)說(shuō)就是一種負(fù)壓過(guò)濾排風(fēng)柜，即能防止實(shí)驗(yàn)操作處理過(guò)程中某些含有危險(xiǎn)性或未知性生物微粒發(fā)生氣溶膠散逸的箱型空氣凈化負(fù)壓安全裝置。其工作原理基于負(fù)壓控制與高效空氣過(guò)濾技術(shù)，通過(guò)向外抽吸柜內(nèi)空氣，保持柜內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)，并利用垂直氣流保護(hù)操作人員。同時(shí)，外界空氣經(jīng)高效空氣過(guò)濾器(high efficiency particulate air filter，HEPA過(guò)濾器)過(guò)濾后進(jìn)入安全柜內(nèi)，以避免處理樣品被污染。

二、生物安全柜的作用

01 保護(hù)操作人員

生物安全柜通過(guò)高效的空氣過(guò)濾系統(tǒng)和負(fù)壓控制機(jī)制，能夠有效防止有害微生物的逃逸和交叉污染，減少因接觸有害物質(zhì)而導(dǎo)致的健康風(fēng)險(xiǎn)。

02 保護(hù)樣品

在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，生物安全柜能夠有效防止樣品微生物污染。

03 保護(hù)環(huán)境安全

生物安全柜內(nèi)的空氣經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾器過(guò)濾后再排放到大氣中，有助于防止有害微生物對(duì)環(huán)境造成污染。

三、生物安全柜的分類與選擇

根據(jù)氣流及隔離屏障設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)，生物安全柜分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)。其中，Ⅱ級(jí)生物安全柜是目前應(yīng)用最為廣泛的柜型，根據(jù)入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式又可分細(xì)為A1型、A2型、B1型和B2型。

等級(jí)分類：I級(jí)、II級(jí)、III級(jí);其中II級(jí)又依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式分為四種類型：即A1、A2、B1、B2(A2、B2為常用類型)。

四、II級(jí)A1、A2、B1、B2四類型區(qū)別對(duì)比：

★A1型安全柜前窗操作口氣流的低流速為0.38m/s。有70%氣體通過(guò)HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排出。但不能保證所有生物學(xué)污染的管道均為負(fù)壓狀態(tài)，或由負(fù)壓的管道和壓力通風(fēng)系統(tǒng)圍繞。

★A2型安全柜前窗操作口氣流的低流速為0.5m/s。70%氣體通過(guò)HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過(guò)排氣口過(guò)濾排出。A2型安全柜的負(fù)壓環(huán)繞污染區(qū)域的設(shè)計(jì)，阻止了柜內(nèi)物質(zhì)的泄漏。

★B1型70%氣體通過(guò)排氣口HEPA過(guò)濾器排出，30%的氣體通過(guò)供氣口HEPA過(guò)濾器再循環(huán)至工作區(qū)。所有被生物污染的部位均應(yīng)保持負(fù)壓。

★B2型為100%全排型安全柜，無(wú)內(nèi)部循環(huán)氣流，柜內(nèi)氣流過(guò)濾后全部排入大氣，不再進(jìn)入安全柜循環(huán)，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制。

五、生物安全柜結(jié)構(gòu)組成

1.空氣過(guò)濾系統(tǒng) 2.外排風(fēng)箱系統(tǒng) 3.滑動(dòng)前窗驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 4.光源 5.控制面板

六.生物安全柜在不同領(lǐng)域的應(yīng)用

生物安全柜廣泛應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、疾病預(yù)防與控制、生物制藥、食品衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測(cè)、科研與教學(xué)等領(lǐng)域，是實(shí)驗(yàn)室生物安全中一級(jí)防護(hù)屏障中最基本的安全防護(hù)設(shè)備。

(醫(yī)院)

(疾控中心)

(科研機(jī)構(gòu))

結(jié)語(yǔ)：生物安全柜作為實(shí)驗(yàn)室生物安全中一級(jí)防護(hù)屏障中最基本的安全防護(hù)設(shè)備，廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、基因工程、生物制品等領(lǐng)域的科研、教學(xué)、臨床檢驗(yàn)和生產(chǎn)中。

臨床實(shí)驗(yàn)室怎么選擇生物安全柜

1、  生物安全柜的分級(jí)及功能

生物安全柜分為Ⅰ級(jí)(BSL-1)、Ⅱ級(jí)(BSL-2)和Ⅲ級(jí)(BSL-3)生物安全柜;BSL-2級(jí)生物安全柜又分為A型、B型、B2型、B3型。

生物安全柜其功能如下：BSL-1級(jí)生物安全柜可提供人員和環(huán)境的保護(hù)，但不提供對(duì)樣本的保護(hù)，常被用作特殊的密封設(shè)備(如離心)，或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過(guò)程。BSL-2級(jí)生物安全柜可提供人員、環(huán)境和樣本的保護(hù)，其中B2型為全排風(fēng)式生物安全柜，沒(méi)有空氣在安全柜內(nèi)循環(huán)，可同時(shí)提供基本的生物和化學(xué)防護(hù)。BSL-3級(jí)生物安全柜可提供人員、環(huán)境和樣本的最大保護(hù)，用于操作四級(jí)生物安全水平的微生物或病原體。

2、  生物安全柜的正確選型

實(shí)驗(yàn)室選擇生物安全柜時(shí)應(yīng)詳細(xì)了解從事傳染性微生物工作中的生物安全級(jí)別所包括的主要素，根據(jù)給個(gè)人、環(huán)境、社會(huì)提供的保護(hù)情況選取不同級(jí)別的生物安全柜。

2.1生物安全一級(jí)(BSL-1)：適合用于非常熟悉的病源，該病源不會(huì)經(jīng)常引發(fā)健康成人疾病，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境潛在危險(xiǎn)小，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有必要和建筑物中的一般行走區(qū)分開(kāi)，一般按照標(biāo)準(zhǔn)的分級(jí)生物操作在開(kāi)放的實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面上開(kāi)展工作。不要求一般也不使用特殊的抑制設(shè)備和設(shè)施(生物安全柜)。

2.2 生物安全二級(jí)(BSL-2)：適合于對(duì)人和環(huán)境有中度潛在危險(xiǎn)的病源。與BSL-1的區(qū)別在于：①實(shí)驗(yàn)人員均應(yīng)接受過(guò)病源處理方面的特殊培訓(xùn)，并由有資格的工作者指導(dǎo)。②進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)限制進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。③對(duì)于污染的銳器應(yīng)特別注意。④某些可能產(chǎn)生傳染性氣溶膠或飛濺物的過(guò)程應(yīng)在生物安全柜中或其他物力抑制設(shè)備中進(jìn)行，可選用Ⅰ、Ⅱ級(jí)生物安全柜。

2.3 生物安全三級(jí)(BSL-3)：應(yīng)用于臨床、診斷、教學(xué)、研究或者生產(chǎn)設(shè)施，在該級(jí)別中開(kāi)展有關(guān)內(nèi)源性和外源性病原的工作。若因暴露而吸入該病原會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的可能致死的疾病。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在處理致病性的可能使人致死的病原方面受過(guò)專業(yè)訓(xùn)練，并由對(duì)該病原工作有經(jīng)驗(yàn)的有資格的科學(xué)工作者監(jiān)督。所有與傳染源操作有關(guān)的步驟都在生物安全柜或其他物理抑制裝置中進(jìn)行，最好選用二級(jí)或二級(jí)以上生物安全柜，實(shí)驗(yàn)室需要特殊設(shè)計(jì)和施工，室內(nèi)為負(fù)壓。

2.4 生物安全四級(jí)(BSL-4)應(yīng)用于對(duì)生命有高度危險(xiǎn)的危險(xiǎn)性病原或外源性病原?？赏ㄟ^(guò)氣溶膠而致實(shí)驗(yàn)室感染或未知傳染風(fēng)險(xiǎn)，且引起致命的有關(guān)病原，應(yīng)選用三級(jí)生物安全柜及正壓防護(hù)服，如SARS病毒對(duì)人或環(huán)境具有中度潛在危險(xiǎn)，對(duì)攜帶該病毒的患者樣本處理均應(yīng)在生物安全二級(jí)(BSL-2 )或二級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，為了對(duì)操作人員和環(huán)境及樣品均提供有效的保護(hù)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用二級(jí)以上或全排風(fēng)式生物安全柜(B2型)。

3、生物安全柜使用中應(yīng)注意的問(wèn)題

3.1對(duì)人員的管理

3.1.1 只有經(jīng)過(guò)培訓(xùn)和指導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)室工作人員才能操作該設(shè)備，未經(jīng)培訓(xùn)人員一律不能使用。

3.1.2 禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，禁止工作人員在操作設(shè)備時(shí)吸煙以及處理隱性眼鏡等。

3.1.3 工作人員操作完成后應(yīng)如實(shí)填寫《使用記錄》。

3.2 對(duì)設(shè)備的管理

3.2.1 對(duì)生物安全柜采用單獨(dú)供電，以免其他設(shè)備發(fā)生意外導(dǎo)致生物安全柜失效。

3.2.2 設(shè)備頂部通風(fēng)口不能被任何東西覆蓋以保證排氣通暢。

3.2.3 設(shè)備出現(xiàn)報(bào)警時(shí)應(yīng)停止使用，查明原因確保安全后再使用。如出現(xiàn)系統(tǒng)失效的訊號(hào)時(shí)，因空氣不能被有效的過(guò)濾而不能繼續(xù)使用該設(shè)備進(jìn)行操作。

3.2.4 更換空氣過(guò)濾器時(shí)應(yīng)與廠家工程師聯(lián)系，并進(jìn)行更換，實(shí)驗(yàn)室工作人員不能私自進(jìn)行更換，以免操作不當(dāng)造成對(duì)周圍人員和環(huán)境的污染。

3.2.5 用過(guò)的過(guò)濾器必須放在密閉的容器中，并在明確的位置注明其可能含有危險(xiǎn)的微生物，引起注意并進(jìn)行特殊處理。

3.2.6新購(gòu)置的生物安全柜在使用之前或維護(hù)重新移位以后必須由專業(yè)技術(shù)人員對(duì)生物安全柜的整體性能進(jìn)行認(rèn)證，每臺(tái)生物安全柜應(yīng)該至少每年進(jìn)行一次測(cè)試和認(rèn)證，以確保操作的安全。

3.2.7 生物安全柜性能測(cè)試應(yīng)包括：送風(fēng)氣流的速度和送風(fēng)量的測(cè)試，進(jìn)口處進(jìn)風(fēng)速度測(cè)試，氣流煙霧流型試驗(yàn)，空氣過(guò)濾器滲透試驗(yàn)，安全柜泄露試驗(yàn)，電器漏電和接地電阻及極性試驗(yàn)，光照強(qiáng)度試驗(yàn)，振動(dòng)試驗(yàn)，噪音水平試驗(yàn)，紫外線燈測(cè)試等。

3.3 工作前的準(zhǔn)備

3.3.1 在開(kāi)始工作前要讓生物安全柜封機(jī)至少運(yùn)行3-5分鐘，使安全柜內(nèi)的空氣進(jìn)行凈化.

3.3.2 安全柜的工作臺(tái)面、內(nèi)壁和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭，再用無(wú)菌蒸餾水進(jìn)行擦拭，以清除殘余的消毒劑。

3.3.3 放到生物安全柜內(nèi)的容器和材料的表面應(yīng)以75%的酒精擦拭，以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi)。

4、操作中的注意事項(xiàng)

4.1 操作人員必須做好個(gè)人防護(hù)后才能進(jìn)行生物安全柜的操作。

4.2 操作者先把手臂放入生物安全柜內(nèi)大約一分鐘，才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，這樣可以使安全柜穩(wěn)定并且能讓氣流清掃掉手臂表面的微生物污染。

4.3 所有的操作應(yīng)該在距離前面的格柵四英寸里面的工作臺(tái)面上進(jìn)行，前面的格柵不能被任何物品阻擋。

4.4 所有的材料應(yīng)該放在距離安全柜前面的格柵和后面工作臺(tái)面邊緣盡可能遠(yuǎn)的位置，容易產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備(如攪拌器、離心機(jī)等)，應(yīng)該靠近安全柜的后部放置。

4.5 操作時(shí)的動(dòng)作應(yīng)該從工作臺(tái)面的清潔區(qū)到污染區(qū)，一般是從左側(cè)到右側(cè)(習(xí)慣于左手操作的人員相反)。

4.6 在生物安全柜內(nèi)如發(fā)生少量的噴灑時(shí)，應(yīng)用污染清除吸收紙巾立即進(jìn)行處理，并將使用過(guò)的紙巾放到生物危害包里，再用浸泡消毒液的毛巾立即進(jìn)行擦拭消毒，如發(fā)生大量的溢出時(shí)，要求廣泛的消毒，安全柜內(nèi)的所有物品應(yīng)該進(jìn)行表面消毒，并拿出安全柜，使用消毒液的作用時(shí)間應(yīng)維持在20-30分鐘。

4.7 生物安全柜內(nèi)禁止使用酒精燈，使用酒精燈進(jìn)行消毒接種工具容易發(fā)生危險(xiǎn)，應(yīng)使用電子高溫滅菌設(shè)備。

4.8工作完成時(shí)所有容器和設(shè)備應(yīng)進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜，對(duì)安全柜的臺(tái)面、邊緣、后壁和觀察窗內(nèi)側(cè)進(jìn)行擦拭、消毒。

4.9 工作人員離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)摘下手套、脫下工作服并進(jìn)行洗手。

總之：臨床實(shí)驗(yàn)室(包括HIV實(shí)驗(yàn)室)是一個(gè)對(duì)人類具有一定危險(xiǎn)的工作場(chǎng)所，保護(hù)臨床實(shí)驗(yàn)室的安全和人員健康是防止環(huán)境污染的第一步和首要工作。生物安全包括生物安全設(shè)施、生物安全設(shè)備、良好的病原微生物學(xué)操作以及嚴(yán)格的管理，而實(shí)驗(yàn)室生物安全設(shè)備的投入是其中不可少的一個(gè)環(huán)節(jié)，了解生物安全級(jí)別及其相關(guān)知識(shí)，正確選擇生物安全柜及明確操作中的注意事項(xiàng)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室做好安全防護(hù)工作保護(hù)工作人員的安全和健康，具有重要意義。

抗感染藥品調(diào)配操作要求

a)藥品核對(duì)：按輸液標(biāo)簽核對(duì)藥品名稱、規(guī)格、數(shù)量、有效期和藥品外觀完好性。

b)藥品擺放：藥品核對(duì)后，應(yīng)擺放在生物安全柜工作區(qū)域（應(yīng)符合表1規(guī)定）。不得同時(shí)擺放兩組或兩組以上藥品。

c)配藥器選擇與使用：選擇適宜規(guī)格的配藥器或一次性無(wú)菌注射器，檢查外包裝，如有損壞或超過(guò)有效期的不得使用。

d)加藥口消毒：先去除基礎(chǔ)輸液袋（瓶）加藥處拉環(huán)及西林瓶的瓶蓋，然后對(duì)橡膠塞或安瓿瓶頸進(jìn)行消毒。

e)每完成一組混合調(diào)配操作應(yīng)立即清理工作臺(tái)面，不得遺留與下一組調(diào)配作業(yè)無(wú)關(guān)的藥品及物品，必要時(shí)用 75%酒精擦拭消毒。

f)調(diào)配過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌手套消毒，若出現(xiàn)污染或破損時(shí)，應(yīng)立即更換。連續(xù)工作 60min 應(yīng)更換無(wú)菌手套。

02

危害藥品調(diào)配操作要求

a)危害藥品調(diào)配操作中，應(yīng)遵守抗感染藥品調(diào)配操作 a)、b)、c)、d)、e)、f)的要求。

b)危害藥品應(yīng)嚴(yán)格遵守負(fù)壓調(diào)配技術(shù)。

d)調(diào)配過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌手套消毒，若出現(xiàn)污染或破損時(shí)，應(yīng)立即更換。危害藥品連續(xù)工作每30min 應(yīng)更換手套。

03

附表

表1 生物安全柜工作臺(tái)面區(qū)域劃分要求