丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）檢測(cè)試劑盒（賴氏比色法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1561

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

轉(zhuǎn)氨酶是催化α -氨基酸和α -酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)舊稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)ALT濃度遠(yuǎn)高于血清，肝細(xì)胞破壞后血清ALT立即迅速升高，因此ALT被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測(cè)指標(biāo)。

尚寶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒(賴氏比色法)其檢測(cè)原理是ALT催化丙氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，其反應(yīng)公式如下：L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+L-谷氨酸。

肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的腙，在堿性條件下腙的吸收光譜有差異，通過分光光度計(jì)檢測(cè)在505nm處差異，以等摩爾濃度計(jì)算出丙酮酸的生成量，進(jìn)而計(jì)算酶的活性。100T該檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)50個(gè)樣本(不含標(biāo)準(zhǔn)品)，該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 離心管

3. 水浴鍋或恒溫箱

4. 比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟 (僅供參考) ：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20℃保存1個(gè)月有效，用于 ALT/GPT的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存1個(gè)月有效，用于ALT/GPT的檢測(cè)。

③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的ALT/GPT含量。

2. 制作ALT標(biāo)準(zhǔn)曲線：取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)1支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液1ml，充分混勻，即配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)，4℃保存?zhèn)溆?。臨用前，按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)：丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1：49的比例混合，即為丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)工作液-丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(2mmol/L)，

按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，設(shè)定平行檢測(cè)管，求平均值。

混勻，向各管中加入苯肼顯色液0.2ml，混勻，37℃孵育20min，加入ALT顯色基液2ml，混勻。室溫放置 5min，以蒸餾水調(diào)零，分光光度計(jì)505nm處讀取各管吸光度。各管吸光度均減去“0”號(hào)管吸光度，所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對(duì)應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。注意：尚寶標(biāo)準(zhǔn)品用分光光度計(jì)檢測(cè)參考值在0.3~0.9之間，加入 ALT顯色基液后其顏色依次為黃色至棕紅色，應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其顏色會(huì)加深，由于檢測(cè)儀器、操作手法等條件的不同，參考值范圍會(huì)有波動(dòng)。

3. ALT加樣：按照下表設(shè)置對(duì)照管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的ALT 酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

4. ALT測(cè)定：混勻，室溫放置5min，比色杯光徑1cm，以蒸餾水調(diào)零，分光光度計(jì)505nm處測(cè)定對(duì)照管、測(cè)定管的吸光度(即為A對(duì)照、A測(cè)定 )。

計(jì)算： 

以系列標(biāo)準(zhǔn)管活力卡門單位為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以(A_測(cè)定－A_對(duì)照)之差值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得ALT活力卡門單位。

參考范圍： 成年健康人血清ALT：5~25卡門單位/ml

注意事項(xiàng) ：

1. 苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)過濾后使用或棄用。

2. 由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)做3管的重復(fù)測(cè)定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0”號(hào)管吸光度均值，對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3. 血清中ALT活性在室溫可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月。

4. 成批樣本測(cè)定時(shí)一般無需每份樣本都做自身血清對(duì)照，以試劑空白管代替即可。

5. 對(duì)于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)時(shí)每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照。

6. 嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會(huì)引起測(cè)定管吸光度增高，因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)做自身血清標(biāo)本對(duì)照。

7. 樣本的酶活力大于150卡門單位時(shí)，應(yīng)將樣本進(jìn)行5~10倍稀釋后再行測(cè)定。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。