含量丙酮酸（PA）檢測試劑盒（可見分光光度法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1063

產品規(guī)格：50管/48樣

產品簡介：

丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。

丙酮酸與2,4-肼作用，生成丙酮酸-2,4-腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。

產品內容：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體9mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：液體50mL×1瓶， 4℃保存；

丙酮酸鈉標準液，1mg/mL：液體1mL×1瓶， 4℃保存。 

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、丙酮酸提?。?/span> 

1、 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：

提取液體積（mL）為500～1000：1 的比例（建500萬細菌或細胞加1mL提取液），超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次），靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。

2、 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。

3、 血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5～10 的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），進行冰浴勻漿，靜置30min，8000g，常溫離心10min，取上清待測。

4、 標準品的準備：將標準品用蒸餾水稀釋至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0g/ml。

二、測定步驟： 

1、 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至520nm，蒸餾水調零。

2、 取300μL標準品或樣本+100μL試劑一于1.5mLEP管中，混勻，靜置2min，加入500μL試劑二，混勻，于520nm波長處測定吸光值A。

三、丙酮酸含量計算：

1、 根據(jù)標準品濃度和測定值建立標準曲線；y為丙酮酸鈉含量（μg/mL），x為吸光值。

2、 按照血清（漿）體積計算

丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10

3、 按照蛋白濃度計算

丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

4、 按照樣品質量計算

丙酮酸含量（μg/g 鮮重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W

5、 按照細菌或細胞密度計算

丙酮酸含量（μg/10⁴ cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）= y÷500

V1：加入反應體系中樣本體積，0.3mL；V2：加入提取液體積，1 mL；V3：加入血清（漿）體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。