一、什么是生物發(fā)光法 ATP 微孔檢測(cè)技術(shù)？

ATP 微孔板檢測(cè)試劑盒依托螢火蟲(chóng)熒光素酶生物發(fā)光反應(yīng)實(shí)現(xiàn) ATP 定量，區(qū)別于傳統(tǒng)比色法、ELISA 法 ATP 檢測(cè)：比色法依靠酶促顯色測(cè) OD 值、靈敏度僅 μM 級(jí)；ELISA 依托抗原抗體結(jié)合，操作周期長(zhǎng)；而本產(chǎn)品采用生物發(fā)光法，以熒光素酶催化 D - 熒光素、ATP 發(fā)生生化反應(yīng)，光子釋放量與 ATP 濃度線性相關(guān)，靈敏度可達(dá)≤0.001 μM，線性區(qū)間 0.001~1 μM，發(fā)光信號(hào)可穩(wěn)定維持 5~30 min，規(guī)避瞬時(shí)發(fā)光帶來(lái)的讀數(shù)誤差。

ATP生物發(fā)光反應(yīng)原理：ATP + D-熒光素 + 熒光素酶+輔因子 → 氧化熒光素+光子；RLU發(fā)光強(qiáng)度與ATP摩爾濃度呈正比。

二、試劑盒可適配哪些生物樣本檢測(cè)？

該試劑盒適配細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞裂解液、動(dòng)物組織裂解液三類主流生物樣本，不同樣本前處理方案差異化：懸浮細(xì)胞上清經(jīng) 300 g 低溫離心收集；貼壁 / 沉淀細(xì)胞添加 0.1% Triton X-100-PBS 冰浴裂解；動(dòng)植物組織使用 1% Triton X-100 緩沖液勻漿裂解，裂解后 10000 g 低溫離心取上清，暫存樣本可 -80℃凍存，檢測(cè)前用配套緩沖液梯度稀釋。

三類樣本前處理流程：
   細(xì)胞培養(yǎng)上清：4℃ 300g離心
   細(xì)胞裂解樣本：0.1%Triton冰浴裂解，10000g離心，獲取待測(cè)上清、-80℃?zhèn)溆?/p>

組織裂解樣本：1%Triton勻漿破碎，10000g離心，獲取待測(cè)上清、-80℃?zhèn)溆?/p>

三、哪些科研實(shí)驗(yàn)優(yōu)先選用該試劑盒？

1. 藥物高通量篩選實(shí)驗(yàn)：抗腫瘤藥、小分子化合物細(xì)胞毒性篩選，通過(guò) ATP 含量變化量化藥物對(duì)活細(xì)胞的殺傷效率；
   2. 細(xì)胞增殖與凋亡實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)干預(yù)后細(xì)胞內(nèi) ATP 波動(dòng)，評(píng)價(jià)增殖速率與凋亡水平；
   3. 線粒體能量代謝研究：氧化應(yīng)激、線粒體損傷模型中胞內(nèi) ATP 定量；
   4. 組織生理病理分析：病理造模動(dòng)物臟器組織能量代謝檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)以梯度 ATP 標(biāo)準(zhǔn)品（0.0039~1 μM）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù) RLU 數(shù)值換算樣品 ATP 濃度，試劑盒配套標(biāo)準(zhǔn)品（100 μM）便于梯度倍比稀釋，標(biāo)曲 R2 可達(dá) 0.998 以上，定量準(zhǔn)確度優(yōu)異。ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線適用于細(xì)胞毒性、代謝、藥物篩選數(shù)據(jù)換算。

四、試劑盒使用關(guān)鍵注意事項(xiàng)是什么？

試劑盒組分含檢測(cè)緩沖液、D - 熒光素、輔因子、熒光素酶與 ATP 標(biāo)準(zhǔn)品，試劑需全程冰上保存，-20℃避光儲(chǔ)存有效期 12 個(gè)月；工作液按樣本數(shù)量現(xiàn)配現(xiàn)用，空白孔、標(biāo)品孔、樣品孔各加 50 μL 體系試劑，室溫孵育 5 min 后酶標(biāo)儀讀數(shù)，每次實(shí)驗(yàn)必須同步繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)，不可用于臨床診斷與藥品檢測(cè)。

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