當(dāng)通過(guò)高通量測(cè)序篩選出候選陽(yáng)性突變后，往往需要在成百上千的大樣本隊(duì)列中進(jìn)行驗(yàn)證，以評(píng)估其頻率、與表型的關(guān)聯(lián)性或臨床診斷效能。如何選擇一種既經(jīng)濟(jì)又可靠、既靈敏又高通量的驗(yàn)證方法？我們提供兩種主力技術(shù)方案：PCR聯(lián)合連接酶檢測(cè)反應(yīng)（PCR-LDR）適用于已知位點(diǎn)的高通量分型；多重PCR擴(kuò)增子捕獲+二代測(cè)序則兼顧已知和未知位點(diǎn)、可并行檢測(cè)數(shù)百個(gè)擴(kuò)增子。

為什么需要專門的隊(duì)列驗(yàn)證技術(shù)？

在突變發(fā)現(xiàn)階段，NGS雖然合適，但成本依然較高，且針對(duì)少量位點(diǎn)進(jìn)行大樣本全基因組/外顯子測(cè)序的投入產(chǎn)出比不佳。因此，對(duì)已明確的少數(shù)候選位點(diǎn)進(jìn)行大規(guī)模人群或樣本隊(duì)列的基因分型/突變篩查，需要采用中通量、低成本、高準(zhǔn)確性的靶向技術(shù)。理想的技術(shù)應(yīng)滿足：可擴(kuò)展性、靈敏度和特異性、經(jīng)濟(jì)高效。

我們提供的兩種核心服務(wù)——PCR-LDR和多重PCR擴(kuò)增子捕獲+二代測(cè)序——正是基于這些需求設(shè)計(jì)，已在大量臨床與科研隊(duì)列項(xiàng)目中得到驗(yàn)證。

方案一：PCR-LDR

準(zhǔn)確率高：連接酶的識(shí)別特異性，能準(zhǔn)確區(qū)分SNP、點(diǎn)突變。

低成本：無(wú)需測(cè)序儀，僅需普通PCR儀和毛細(xì)管電泳儀，實(shí)驗(yàn)成本較低。

檢測(cè)靈活：能根據(jù)不同的檢測(cè)需求進(jìn)行調(diào)整，單次操作可處理幾個(gè)到上百個(gè)樣本。

方案二：多重PCR擴(kuò)增子捕獲+二代測(cè)序

超高通量：平均測(cè)序深度超過(guò)1000X，能夠同時(shí)對(duì)成百上千的位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)范圍廣：可對(duì)SNP位點(diǎn)以及周圍序列進(jìn)行測(cè)序，更準(zhǔn)確，更靈敏。

測(cè)序質(zhì)量高：測(cè)序質(zhì)量Q30>90%，檢出率超過(guò)95%。

結(jié)語(yǔ)

隊(duì)列驗(yàn)證是連接“突變發(fā)現(xiàn)”與“功能/臨床意義”的橋梁，選擇合適的技術(shù)平臺(tái)決定項(xiàng)目效率、數(shù)據(jù)質(zhì)量和最終結(jié)論的可信度。無(wú)論您需要經(jīng)濟(jì)高效的已知位點(diǎn)大規(guī)模分型（PCR-LDR），還是靈活深度的靶向區(qū)域測(cè)序（多重PCR+二代測(cè)序），我們都將用專業(yè)的技術(shù)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)控和貼心的服務(wù)，為您的隊(duì)列驗(yàn)證項(xiàng)目保駕護(hù)航。讓我們攜手，將候選突變轉(zhuǎn)化為可發(fā)表的科學(xué)發(fā)現(xiàn)和可落地的臨床標(biāo)志物。