LUYOR-3415RG 在農桿菌侵染煙草葉片 GFP 瞬時表達篩選中的應用

應用背景

在植物瞬時表達系統(tǒng)中，常利用農桿菌（Agrobacterium tumefaciens）侵染本氏煙（N. benthamiana）葉片，攜帶 35S::GFP 或融合 GFP 標簽的外源基因。傳統(tǒng)陽性鑒定依賴 RT-PCR 或熒光顯微鏡觀察，耗時且通量低。利用 LUYOR-3415RG 手持式熒光激發(fā)燈（365 nm / 450 nm 雙波段） 可在暗室中對侵染后葉片直接進行 無損 GFP 熒光初篩，快速鎖定陽性克隆。

實驗簡程

1. 農桿菌（含 pCAMBIA1300-GFP 等載體）培養(yǎng)至 OD???≈0.6–1.0，注射滲透（syringe infiltration）本氏煙下表皮。

   
   

2. 22–28℃ 暗培養(yǎng) 24–72 h。

   
   

3. 暗室中取 LUYOR-3415RG，切換至 365 nm（UV） 檔，距葉片 3–8 cm 照射：

   
   

• GFP 陽性：葉肉/葉脈處見明顯黃綠熒光（肉眼可見）；

  
  

• 陰性/野生型：僅有極弱葉綠素自發(fā)熒光或無特征綠光。

  
  

4. 陽性葉片標記，用于后續(xù)蛋白提取 / 共聚焦驗證 / PCR 確證。

   
   

結果特點

• 可在侵染后 24–48 h 即見信號，早于表型出現(xiàn)；

  
  

• 同一葉片可多次觀察，不破壞組織，后續(xù)仍可采樣；

  
  

• 對大量轉化材料做 初篩（pre-screening），可減少 60–80% 不必要的 PCR/WB 工作量。

  
  

儀器參數(shù)

• 型號：LUYOR-3415RG

  
  

• 激發(fā)：365 nm（UV）/ 450 nm（Blue），適用于 GFP / RFP 雙檢

  
  

• 光源：LED 冷光源，短時照射不影響葉片活力

  
  

適用于：本氏煙瞬時表達、轉基因煙草 T?/T? 初篩、病毒誘導基因沉默（VIGS）效率評估（GFP 報告）。