標(biāo)簽：愛(ài)賽因生物  ELISA試劑盒  封板膜  酶標(biāo)儀 移液器

    ELISA試劑盒有哪些常見(jiàn)問(wèn)題

    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中?常見(jiàn)問(wèn)題可分為結(jié)果異常、操作異常兩大類(lèi)?，對(duì)應(yīng)問(wèn)題原因和解決方案整理如下，覆蓋90%以上新手操作常見(jiàn)誤區(qū)：

    1.顯色異常

    顯色淡/靈敏度偏低，陽(yáng)性對(duì)照不顯色

    常見(jiàn)原因?：試劑盒未充分平衡室溫、試劑/底物被污染或失活、孵育時(shí)間不足、酶標(biāo)板過(guò)于干燥、樣本濃度超出檢測(cè)范圍

    解決方案?：試劑盒取出后室溫平衡至少20分鐘再使用；重新配置新鮮底物與酶標(biāo)試劑；嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)控制孵育時(shí)間；高濃度樣本先稀釋后再檢測(cè)，確認(rèn)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置正確。

    全部顯色/背景值過(guò)高（OD>0.2）

    常見(jiàn)原因?：洗滌不充分未去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物、封閉不全、重復(fù)使用吸頭造成交叉污染、樣本溶血嚴(yán)重

    解決方案?：保證洗滌次數(shù)，充分拍干每孔液體；適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間；使用一次性吸頭，避免重復(fù)使用；更換非溶血樣本進(jìn)行檢測(cè)。

    2.結(jié)果重復(fù)性差（重復(fù)孔差異大）

    常見(jiàn)原因?：加樣量不均、孔間交叉污染、樣本未充分混勻、邊緣效應(yīng)（外周孔顯色深于中心孔）、包被表面被操作破壞

    解決方案?：提前充分混勻樣本，校準(zhǔn)移液器保證加樣量一致；封板膜不重復(fù)使用，避免交叉污染；孵育時(shí)低速旋轉(zhuǎn)混勻減少邊緣效應(yīng)；操作時(shí)避免移液槍頭刮擦孔底。

    3.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)異常

    常見(jiàn)問(wèn)題?：線(xiàn)性關(guān)系不佳、高濃度段無(wú)梯度、樣本計(jì)算無(wú)結(jié)果

    常見(jiàn)原因?：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤、不同批次試劑混用、標(biāo)準(zhǔn)品污染失活、樣本濃度超出曲線(xiàn)范圍

    解決方案?：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)换煊貌煌卧噭┖?；?biāo)準(zhǔn)品使用一次性吸頭，低溫密封保存；預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索合適稀釋倍數(shù)，確保樣本OD值落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍內(nèi)。

    4.假陽(yáng)性/假陰性結(jié)果

    假陽(yáng)性原因及解決?：非特異性結(jié)合未洗凈、樣本溶血或纖維蛋白原干擾、洗滌不充分導(dǎo)致殘留酶。優(yōu)化洗滌步驟，避免使用溶血/抗凝不全的血漿樣本，保證充分洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)。

    假陰性原因及解決?：樣本濃度過(guò)高引發(fā)鉤狀效應(yīng)、樣本反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白降解。將樣本稀釋后重新測(cè)定，待測(cè)樣本長(zhǎng)期保存建議分裝后-70℃凍存，避免反復(fù)凍融。

    注：以上僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)聯(lián)系品牌或技術(shù)老師!

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