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凝膠色譜柱保養(yǎng)、保存與再生處理方法
凝膠色譜柱是分離純化的核心耗材，填料一旦塌陷、污染或滋生微生物，分離度將急劇下降?？茖W(xué)養(yǎng)護(hù)須貫穿"用后即護(hù)、存前保濕、污后再生"全流程。
一、日常保養(yǎng)：用后即護(hù)
每次分離完畢，須立即用大量去離子水或與流動(dòng)相一致的緩沖液沖洗柱體，流速由高到低漸變，沖洗體積不少于柱體積的十倍，直至基線回零。嚴(yán)禁在高鹽或高濃度有機(jī)相中長(zhǎng)時(shí)間停留，鹽結(jié)晶與溶劑效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致填料收縮塌陷。進(jìn)樣前樣品須經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，防止顆粒堵塞柱床。運(yùn)行壓力超過(guò)額定上限立即停機(jī)，反壓沖洗判斷是否堵塞。
二、保存方法：低溫保濕是關(guān)鍵
短期停用（一周內(nèi)），用20%乙醇或含0.02%疊氮鈉的緩沖液充滿柱體，兩端密封后4℃冷藏。長(zhǎng)期保存（超過(guò)一個(gè)月），須將柱子兩端用堵頭封嚴(yán)，充入高濃度乙醇或乙腈浸泡，防止微生物滋生與填料干涸。嚴(yán)禁干態(tài)保存，凝膠一旦脫水收縮將不可逆失去分離能力。
三、再生處理：三步恢復(fù)性能
當(dāng)柱效下降、峰形拖尾或壓力升高時(shí)，啟動(dòng)再生程序。第一步反沖：將柱體掉頭，以低流速反向沖洗，松動(dòng)板結(jié)的柱床頂層。第二步化學(xué)清洗：依次用0.5mol/LNaOH、去離子水、2mol/LNaCl、去離子水各沖洗兩個(gè)柱體積，去除蛋白質(zhì)吸附與離子污染。第三步平衡：用初始流動(dòng)相充分平衡至基線穩(wěn)定，再用標(biāo)準(zhǔn)蛋白驗(yàn)證柱效，回收率達(dá)標(biāo)方可重新投入使用。若再生后柱效仍不恢復(fù)，說(shuō)明填料已老化，應(yīng)果斷更換。
總結(jié)：用后沖凈防堵塞，保濕低溫防塌縮，反沖化學(xué)再生保柱效——三步到位，色譜柱方能持久如新。
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