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CytoFLEX mosaic光譜流式應(yīng)用于PLA微囊疫苗研究
疫苗是守護(hù)人類健康的重要武器，而佐劑則是決定疫苗“戰(zhàn)斗力”的關(guān)鍵部件。傳統(tǒng)鋁佐劑雖能有效激活體液免疫，卻在細(xì)胞免疫方面存在局限。近日，來自中國的研究團(tuán)隊(duì)利用聚乳酸（PLA）微囊技術(shù)構(gòu)建了時(shí)空耦合的新型復(fù)合佐劑遞送系統(tǒng)，成功實(shí)現(xiàn)了體液與細(xì)胞免疫的協(xié)同增強(qiáng)。該成果發(fā)表于國際期刊《Pharmaceutics》。研究中，CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀為解析復(fù)雜的細(xì)胞免疫機(jī)制提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。
研究亮點(diǎn)速覽：
時(shí)空協(xié)同遞送的PLA微囊
研究團(tuán)隊(duì)利用復(fù)乳法制備了尺寸均一的PLA微囊（4-5 μm），并將模式抗原卵清蛋白（OVA）與小分子免疫佐劑單磷酰脂質(zhì)A（MPLA）共負(fù)載其中。表面免疫增強(qiáng)劑率先激活免疫識別，內(nèi)部抗原被高效遞呈，實(shí)現(xiàn)了時(shí)空耦合的免疫遞送。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，共裝載OVA和MPLA的PLA微囊（OVA&MPLA@MC）不僅誘導(dǎo)了高水平的IgG抗體，更顯著增強(qiáng)了Th1偏向的細(xì)胞免疫應(yīng)答。
CytoFLEX mosaic
助力高維解析T細(xì)胞應(yīng)答
細(xì)胞免疫的評估需要精確測定T細(xì)胞的活化狀態(tài)和效應(yīng)功能。面對脾臟中復(fù)雜的免疫細(xì)胞群體，傳統(tǒng)流式在多色實(shí)驗(yàn)中常受困于熒光光譜重疊。本研究啟用CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀，輕松化解了這一難題。
多參數(shù)全景分析，一管知“免疫”
研究人員設(shè)計(jì)了包含表面標(biāo)志物（CD45、CD3、CD69、MHC II）和胞內(nèi)效應(yīng)分子（Granzyme B、IL-2）的多色方案。通過CytExpert for Spectral軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析，CytoFLEX mosaic憑借其高參數(shù)檢測能力，一次上樣即可獲得單個(gè)T細(xì)胞的完整功能畫像。
結(jié)果直擊：CytoFLEX mosaic數(shù)據(jù)顯示，OVA&MPLA@MC組中CD3? T細(xì)胞中Granzyme B（殺傷主力）和IL-2（生長因子）表達(dá)水平顯著提升，直觀證明了疫苗誘導(dǎo)提升脾臟T細(xì)胞的活化水平與細(xì)胞毒活性（圖1B和圖2A、C）。
圖1：疫苗誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞免疫應(yīng)答評價(jià)。（A）OVA特異性IFN-γ分泌脾細(xì)胞的代表性斑點(diǎn)圖及ELISpot檢測定量結(jié)果。（B）光譜流式細(xì)胞術(shù)檢測CD3? T細(xì)胞中Gzmb?細(xì)胞比例，用于表征細(xì)胞毒活性。（C）Cytobank計(jì)算生成的CD69與MHC II表達(dá)水平的代表性t-SNE圖。顏色深淺代表標(biāo)志物表達(dá)水平。數(shù)據(jù)（n=3）以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示。
圖2：CD3? T細(xì)胞中IL-2的表達(dá)水平。（A）CD3? T細(xì)胞中IL-2?細(xì)胞比例，用于表征多功能T細(xì)胞。數(shù)據(jù)（n=3）以均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示。（B）用于鑒定T細(xì)胞的圈門策略。（C）與（A）中各組相對應(yīng)的CD3? T細(xì)胞中IL-2陽性細(xì)胞的代表性流式點(diǎn)圖。
光譜解析，數(shù)據(jù)去偽存真
CytoFLEX mosaic搭載先進(jìn)的混合泊松光譜解析算法，能夠精準(zhǔn)區(qū)分光譜高度相似的熒光染料，有效去除背景熒光干擾。在檢測活化標(biāo)志物CD69等低表達(dá)分子時(shí)，信噪比高，有助于弱陽性信號的準(zhǔn)確識別。
聯(lián)動Cytobank進(jìn)行降維分析
面對高維流式數(shù)據(jù)，研究團(tuán)隊(duì)將CytoFLEX mosaic采集的光譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytobank v10.7軟件進(jìn)行t-SNE降維可視化分析。Cytobank憑借其云端算法，清晰展示了不同疫苗組間免疫細(xì)胞亞群的分布差異。
Cytobank生成的t-SNE圖譜顯示，OVA&MPLA@MC組在CD3? T細(xì)胞群體中呈現(xiàn)出明顯的活化標(biāo)志物（CD69、MHC II）高表達(dá)聚集區(qū)，而傳統(tǒng)佐劑組則分布相對稀疏，為疫苗增強(qiáng)細(xì)胞免疫的結(jié)論提供了直觀的可視化依據(jù)（圖1C）。
技術(shù)視角：光譜流式
在復(fù)雜免疫評價(jià)中的應(yīng)用
通過本研究，我們可以看到CytoFLEX mosaic與Cytobank的組合在疫苗研發(fā)中的實(shí)用價(jià)值：
CytoFLEX mosaic硬件保障：優(yōu)秀的硬件性能帶來高靈敏度，可捕捉活化初期微弱的受體表達(dá)變化，滿足從巨噬細(xì)胞表型到T細(xì)胞胞內(nèi)因子的多色檢測需求。
CytExpert for Spectral軟件算法加持：操作界面直觀，內(nèi)置混合泊松光譜解析算法，無需復(fù)雜的手動補(bǔ)償調(diào)節(jié)即可完成多色數(shù)據(jù)解析，有助于降低數(shù)據(jù)擴(kuò)散誤差，提升微弱信號與精細(xì)亞群的分辨能力。
Cytobank軟件賦能：無縫對接CytoFLEX mosaic原始數(shù)據(jù)，利用云計(jì)算資源實(shí)現(xiàn)t-SNE等降維分析，將復(fù)雜的熒光信號轉(zhuǎn)化為直觀的生物學(xué)信息，便于挖掘隱藏的免疫亞群特征。
參考文獻(xiàn)
Guan S, Zhang Y, Liu H, et al. Engineered Polylactic Acid (PLA) Microcapsules for Spatiotemporally Coupled Delivery and Synergistically Enhanced Dual Immunity. Pharmaceutics, 2026, 18(4): 456.
DOI: 10.3390/pharmaceutics
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