研究背景

免疫代謝是當(dāng)前的熱門研究領(lǐng)域。脂肪酸合成酶（FASN）作為連接脂質(zhì)代謝與免疫應(yīng)答的關(guān)鍵蛋白，在腫瘤微環(huán)境和慢性炎癥疾病中具有重要作用。已有研究表明，F(xiàn)ASN的異常表達(dá)與M2巨噬細(xì)胞的極化失衡密切相關(guān)，但其作用機(jī)制尚未闡明。M2型巨噬細(xì)胞參與炎癥消退、組織修復(fù)及腫瘤微環(huán)境調(diào)控。

本研究旨在探究干預(yù)FASN后對巨噬細(xì)胞M2極化的影響，為相關(guān)炎癥性疾病及腫瘤的免疫治療提供新的理論依據(jù)和潛在的藥物靶點(diǎn)。

一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與步驟

本研究采用穩(wěn)定性高、極化可控的THP-1細(xì)胞體系建立M2極化模型，并結(jié)合FASN特異性抑制劑W106進(jìn)行靶向干預(yù)。為精準(zhǔn)評估干預(yù)效果，研究以免疫熒光共染技術(shù)，同步檢測M2型標(biāo)志物Arg1和FASN的表達(dá)水平與定位。通過激光共聚焦分析采集細(xì)胞圖像，觀察熒光強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)分子表達(dá)的可視化驗(yàn)證。該技術(shù)路線聚焦“靶向干預(yù)-表現(xiàn)改變-分子關(guān)聯(lián)”的邏輯，適用于巨噬細(xì)胞功能調(diào)控、代謝酶干預(yù)效應(yīng)等機(jī)制的研究，為解析FASN介導(dǎo)的M2極化通路提供支撐。

1，細(xì)胞培養(yǎng)與分組

將THP-1細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。待細(xì)胞密度達(dá)到80%后，將其分為未干預(yù)的M2模型組與FASN干預(yù)組（加入W106抑制劑）。

2，極化誘導(dǎo)

依次進(jìn)行佛波酯、IL-4/IL-13處理后，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育48小時。

3，免疫熒光染色

取出培養(yǎng)板，棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次后，對細(xì)胞進(jìn)行固定、通透及封閉處理。隨后分別加入Arg1、FASN一抗，4℃孵育過夜，次日加入熒光二抗避光孵育1小時，最后以抗熒光淬滅劑封片。

4，圖像采集與分析

通過激光共聚焦顯微鏡觀察并采集細(xì)胞圖像，分析比較兩組細(xì)胞中Arg1和FASN的熒光強(qiáng)度，評估干預(yù)效應(yīng)。

所使用的義翹產(chǎn)品

· 產(chǎn)品類型：兔單抗和兔多抗

· 產(chǎn)品名稱及貨號：

Recombinant Anti-Arginase 1/ARG1 Antibody, Rabbit Monoclonal（產(chǎn)品貨號：101235-T38）

Anti-FASN Antibody, Rabbit Polyclonal （產(chǎn)品貨號: 100685-T10）

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1. 免疫熒光檢測結(jié)果左側(cè)為未干預(yù)的M2組，右側(cè)為FASN抑制劑W106干預(yù)組。藍(lán)色：DAPI染色的細(xì)胞核，綠色：FASN，紅色：Arg1，底部為Merge

在未干預(yù)的M2模型組中，可見明顯的綠色及紅色熒光信號，表明細(xì)胞高表達(dá)FASN并成功極化為M2表型。相比之下，經(jīng)FASN特異性抑制劑W106處理后的干預(yù)組，其細(xì)胞內(nèi)的FASN熒光強(qiáng)度顯著減弱。值得注意的是，伴隨著FASN表達(dá)的下調(diào)，代表M2極化程度的Arg1紅色熒光信號也呈現(xiàn)大幅降低趨勢。這一結(jié)果有力地證實(shí)了抑制FASN的表達(dá)可顯著削弱THP-1細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞的極化能力。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過免疫熒光染色及熒光強(qiáng)度分析，證實(shí)了FASN在THP-1細(xì)胞向M2巨噬細(xì)胞極化過程中具有調(diào)控作用。干預(yù)FASN后，M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物Arg1的熒光強(qiáng)度顯著降低，表明FASN表達(dá)受抑可抑制M2巨噬細(xì)胞極化。該結(jié)果為深入探討FASN參與免疫調(diào)控的分子機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為相關(guān)疾病的靶向治療研究提供了新的思路，后續(xù)可進(jìn)一步開展分子機(jī)制及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)所用特異性抗體均購自義翹神州（Sino Biological），在免疫熒光染色中表現(xiàn)出優(yōu)異的特異性與靈敏度。

實(shí)驗(yàn)方案來自產(chǎn)品使用征文大賽用戶投稿，僅供學(xué)習(xí)交流。