嗜肺巴氏桿菌的PCR檢測方法
嗜肺巴氏桿菌的生理特點(diǎn)
嗜肺巴氏桿菌是革蘭氏陰性小桿菌,主要寄居于嚙齒類和免類的上呼吸道。嗜肺巴氏桿菌是實(shí)驗(yàn)小鼠和大鼠易感染的病原菌,較難通過有效的方法進(jìn)行排除。嗜肺巴斯德桿菌(Pasteurella pneumotropica)是國標(biāo)GB14922-2022中SPF級實(shí)驗(yàn)大小鼠必須排除的項(xiàng)目之一,是嚙齒類實(shí)驗(yàn)動物中重要的巴氏桿菌科物種。嗜肺巴氏桿菌的宿主廣泛,人和嚙齒類動物均可感染嗜肺巴氏桿菌,感染可能來自與動物的密切接觸或被鼠咬傷。嚙齒類動物感染嗜肺巴氏桿菌后可不表現(xiàn)出任何病理癥狀。嗜肺巴氏桿菌與其他病原共感染后出現(xiàn)癥狀,如支原體、仙臺病毒等共同感染,可加重疾病的過程。
一般來說,嗜肺巴斯德桿菌主要包括兩種生物型:Jawetz型(J型)和Heyl型(H型),另外還有一些其他分離株。近年重新分類后,上述兩種類型分為:嗜肺嚙齒桿菌(Rodentibacter pneumotropicus,即原嗜肺巴斯德桿菌J型)和 嚙齒桿菌H型(Rodentibacter heylii,即原嗜肺巴斯德桿菌H型)。目前的檢測方法不對這兩種類型進(jìn)行分類。
嗜肺巴氏桿菌的傳統(tǒng)檢測方法
國標(biāo)GB/T 14926.12-2001中指出,嗜肺巴氏桿菌是革蘭氏陰性小桿菌,嗜肺巴斯德桿菌具有特殊的生化反應(yīng),菌體可與相應(yīng)的免疫血清在玻片上形成肉眼可見的凝集反應(yīng),據(jù)此可進(jìn)行該菌的分離培養(yǎng)和檢測。
嗜肺巴氏桿菌的qPCR檢測方法
PCR是基于核酸DNA的檢測方法,靈敏度高,可在病原檢測初期檢測到。應(yīng)用于病原體檢測時(shí),檢測方法簡單,不需要長時(shí)間培養(yǎng),操作性強(qiáng),可用于篩查。
翼和生物提供嗜肺巴氏桿菌的PCR檢測試劑盒,是多重病原同時(shí)檢測的qPCR試劑盒。多重?zé)晒馔瑫r(shí)檢測鼠棒狀桿菌Ck、嗜肺巴斯德桿菌Pp、支氣管鮑特桿菌Bb。在必檢病原菌聯(lián)檢試劑盒的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì),用于對檢出的陽性樣本進(jìn)一步確認(rèn)所感染病原菌,當(dāng)然如果研究者懷疑樣本感染了上述三種病原,可直接用該鑒定試劑盒進(jìn)行檢測。
本試劑盒采用多套引物探針,在FAM(鼠棒狀桿菌 Ck)、HEX(嗜肺巴斯德桿菌Pp)、ROX(支氣管鮑特桿菌 Bb)三個(gè)通道檢測3種病原菌,另外1套引物探針在CY5通道檢測內(nèi)參DNA。該試劑盒具有以下特點(diǎn):
靈敏:檢測靈敏度較高,10 CFU可被有效檢出。
穩(wěn)定:全程閉管操作,無交叉污染。
可靠:含內(nèi)參對照,避免假陰性。
方便:操作簡單,一步法檢測。
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