鼠痘病毒的熒光定量qPCR檢測方法
鼠痘病毒的生物學(xué)特點(diǎn)
鼠痘病毒,又稱小鼠脫腳病病毒,,屬于痘病毒科正痘病毒屬。感染小鼠的 DNA 病毒,感染小鼠足部、尾部腫脹潰爛、壞死脫落(故稱“脫腳病”)。
鼠痘病毒(ectromelia virus,ECTV)是一類有囊膜,基因組為180~200 kb大小的線性雙股DNA病毒,是動物病毒中體積大、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的DNA病毒,病毒粒子呈卵圓形或磚形。ECTV的自然宿主為小鼠,1930年在英國的實(shí)驗小鼠種群中分離,隨后在墨西哥、日本、美國、中國均有發(fā)現(xiàn)。
高致死性:急性爆發(fā)時,死亡率高,尤其對封閉群小鼠是場災(zāi)難。
隱蔽性:潛伏感染期間小鼠外觀健康,常規(guī)血清學(xué)檢測(如早期ELISA)可能呈陰性,卻在應(yīng)激狀態(tài)下突然爆發(fā),會嚴(yán)重干擾腫瘤、免疫、代謝等領(lǐng)域的研究數(shù)據(jù)可靠性。一旦污染設(shè)施,可能形成周期性爆發(fā)。
鼠痘病毒的傳統(tǒng)檢測方法
傳統(tǒng)的病毒檢測用 ELISA 的方法檢測病毒抗體,但是 ELISA 的方法容易出現(xiàn)假陽性,并且對于免疫缺陷小鼠來說無法產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,導(dǎo)致檢測出現(xiàn)假陰性。
鼠痘病毒熒光定量qPCR檢測方法
團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CALAS 44—2017《實(shí)驗動物 鼠痘病毒PCR檢測方法》標(biāo)準(zhǔn)文件中描述了鼠痘病毒的PCR檢測方法。團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CALAS 89—2020《實(shí)驗動物 鼠痘病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增 (LAMP)檢測方法》描述了鼠痘病毒的等溫擴(kuò)增 (LAMP)檢測方法,檢測的也是核酸DNA。兩個標(biāo)準(zhǔn)的出臺說明核酸檢測方法在小鼠肝炎病毒檢測領(lǐng)域的重要應(yīng)用價值和可行性,也說明了PCR檢測方案的可行性。
翼和生物開發(fā)了針對鼠痘病毒的qPCR檢測方案,并且翼和多重?zé)晒鈗PCR檢測方案可以在一個反應(yīng)中檢測多個病原體。例如SPF.M/R-OVH-005試劑盒中FAM、HEX、ROX通道分別檢測鼠痘病毒Ect、小鼠腦脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY三種病毒。翼和生物鼠痘病毒的qPCR檢測試劑盒靈敏度高、操作方便,適合進(jìn)行大樣本量的快速篩查。并且翼和生物提供DNA/RNA的核酸共提取試劑盒,提取過程中加入了內(nèi)參核酸基因組,用于質(zhì)控整個提取和檢測過程,內(nèi)參通過CY5通道進(jìn)行檢測。試劑盒的靈敏度高,特異性強(qiáng),便于操作。并且多重?zé)晒舛縬PCR檢測試劑盒的成本相對較低,便于開展大樣本量的篩查。
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