小鼠肝炎病毒的熒光定量qPCR檢測(cè)方案
小鼠肝炎病毒 ( Mouse Hepatitis Virus, MHV )的生物學(xué)特點(diǎn)
小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒 ( MHV ) 感染引起的小鼠常見(jiàn)疾病,MHV 的分布范圍廣,傳播范圍廣,易大范圍暴發(fā),不隨季節(jié)變化。一般情況下,大部分小鼠感染 MHV 為隱性感染,但是特殊情況下會(huì)大范圍暴發(fā)。小鼠肝炎病毒是國(guó)標(biāo) GB14922—2022 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物、寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》中規(guī)定的必須排除的病毒。
小鼠肝炎病毒 ( MHV ) 屬冠狀病毒科中的冠狀病毒屬,MHV 是單股正鏈 RNA 病毒,呈多形態(tài)或圓形,直徑一般為80~160 nm。小鼠感染 MHV 后小鼠會(huì)有腸炎和肝炎的臨床表現(xiàn),根據(jù) MHV 特性的不同,可將 MHV 分為兩類:腸毒株和呼吸毒株,不同的 MHV 毒株感染后的臨床差異會(huì)略有不同。糞便和墊料是MHV重要的傳染源,也可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播。
小鼠肝炎病毒的傳統(tǒng)檢測(cè)方法
傳統(tǒng)的病毒檢測(cè)用 ELISA 的方法檢測(cè)病毒抗體,但是 ELISA 的方法容易出現(xiàn)假陽(yáng)性,并且對(duì)于免疫缺陷小鼠來(lái)說(shuō)無(wú)法產(chǎn)生相應(yīng)的抗體,導(dǎo)致檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。核酸病毒的增殖比抗體出現(xiàn)的時(shí)間更早,更易于早發(fā)現(xiàn)、早處理。
小鼠肝炎病毒的熒光定量qPCR檢測(cè)方法
地方標(biāo)準(zhǔn)中DB36/T 1903-2023《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠肝炎病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法》和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/CALAS 25—2017《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠肝炎病毒 PCR 檢測(cè)方法》兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)文件中描述了小鼠肝炎病毒的PCR檢測(cè)方法或者熒光定量PCR檢測(cè)方法。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的出臺(tái)說(shuō)明核酸檢測(cè)方法在小鼠肝炎病毒檢測(cè)領(lǐng)域的重要應(yīng)用價(jià)值和可行性。
翼和生物開(kāi)發(fā)了針對(duì)小鼠肝炎病毒的qPCR檢測(cè)方案,通過(guò)FAM熒光通道檢測(cè)小鼠肝炎病毒,同時(shí)檢測(cè)過(guò)程中設(shè)置了內(nèi)參CY5通道的檢測(cè),可以質(zhì)控檢測(cè)過(guò)程。并且翼和多重?zé)晒鈗PCR檢測(cè)方案可以在一個(gè)反應(yīng)中檢測(cè)多個(gè)病原體。例如
SPF.M/R-RVF-001試劑盒中,F(xiàn)AM、HEX、ROX通道分別檢測(cè)Ⅲ型呼腸孤病毒Reo-3、仙臺(tái)病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV三種病毒。SPF.M/R-CV-001試劑盒中,F(xiàn)AM、HEX通道分別檢測(cè)小鼠肝炎病毒MHV、小鼠諾如病毒MNV兩種病毒。翼和生物小鼠肝炎病毒的qPCR檢測(cè)試劑盒靈敏度高、操作方便,適合進(jìn)行大樣本量的快速篩查。
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