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【應(yīng)用“泌”籍】特殊體液外囊泡超速離心純化案例
特殊體液包括：尿液、淚液、腦脊液、消化液等。而細(xì)胞外囊泡（EV）存在于多種體液中，能反映來(lái)源組織的生理或病理狀態(tài)，具有極大的潛力用于各類系統(tǒng)疾病診斷。特殊體液外囊泡的相關(guān)研究是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。
參考文獻(xiàn)：
The potential roles of cigarette smoke-induced extracellular vesicles in oral leukoplakia.
那么，如何通過(guò)金標(biāo)準(zhǔn)的超速離心法
來(lái)純化相應(yīng)的特殊體液外囊泡了？
尿液樣品
腎病綜合征患者尿液的復(fù)雜成分會(huì)干擾尿細(xì)胞外囊泡的分離，因此需要額外的步驟（如密度梯度離心）來(lái)進(jìn)一步純化尿液細(xì)胞外囊泡，使其免受與尿液細(xì)胞外囊泡共分離的高分子量蛋白質(zhì)復(fù)合物（如白蛋白）的污染。該尿EV分離方案，具有高特異性和可重復(fù)性?？梢匝芯扛叨燃兓哪蛞篍V的分子復(fù)雜性，支持識(shí)別EV特異性功能和生物標(biāo)志物。
基于線性密度梯度超速離心的尿EV分離方案示意圖
參考文獻(xiàn)：
Isolation and characterization of urinary extracellular vesicles: implications for biomarker discovery.
Preparation of Multi-omics Grade Extracellular Vesicles by Density-Based Fractionation of Urine.
唾液
用超聲前處理唾液和使用碘克沙醇梯度液成功的對(duì)唾液EV進(jìn)行分餾。同時(shí)，為了提高樣品處理和分析的通量，使用定角轉(zhuǎn)子代替水平轉(zhuǎn)子，將密度梯度離心的時(shí)間從17小時(shí)減少到4小時(shí)，大大縮短了整體的離心操作時(shí)間。
基于密度梯度離心的唾液EV分離方案示意圖
參考文獻(xiàn)：
Isolation of human salivary extracellular vesicles by iodixanol density gradient ultracentrifugation and their characterizations.
Method optimisation to enrich small extracellular vesicles from saliva samples.
眼淚
淚液是外泌體分離合適的來(lái)源，因?yàn)榕c血液相比，它們的蛋白質(zhì)和碎片更少，并且可以無(wú)創(chuàng)分離。通過(guò)將淚液試紙從雙眼收集眼淚。隨后，將試紙轉(zhuǎn)移到PBS中，使用差速離心法即可完成外囊泡的純化，方便進(jìn)行后續(xù)的定量分析。
差速離心淚液EV分離方案示意圖
參考文獻(xiàn)：
Oncogenic miRNAs Identified in Tear Exosomes From Metastatic Breast Cancer Patients
Role of tear exosomes in the spread of herpes simplex virus type 1 in recurrent herpes simplex keratitis.
Single-particle analysis of tear fluid reveals abundant presence of tissue factor-exposing extracellular vesicles with strong coagulation activity.
腦脊液
腦脊液EV可能既是中樞神經(jīng)系統(tǒng)通信的中介又是促成者。因此，它們作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病生物標(biāo)志物的潛力激發(fā)了人們對(duì)腦脊液EV研究的極大興奮和關(guān)注。
差速離心腦脊液EV分離方案示意圖
參考文獻(xiàn)：
The morphology and biochemistry of nanostructures provide evidence for synthesis and signaling functions in human cerebrospinal fluid.
Recommendations for reproducibility of cerebrospinal fluid extracellular vesicle studies.
關(guān)節(jié)液
關(guān)節(jié)液含有高濃度的高分子量透明質(zhì)酸，導(dǎo)致其非常粘稠。用透明質(zhì)酸酶進(jìn)行滑液預(yù)處理，然后通過(guò)超速離心來(lái)純化EV，不會(huì)形成大量聚集體或損壞EV。
關(guān)節(jié)液EV分離方案流程圖
參考文獻(xiàn)：
Synovial fluid pretreatment with hyaluronidase facilitates isolation of CD44+ extracellular vesicles.
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