這是食品、飲料等行業(yè)中最常規(guī)的糖類檢測方法，主要針對果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖等低分子量糖類。
分離機制：使用氨基柱 (NH2柱)。由于糖類分子具有極性，在非極性的流動相（如高比例乙腈）和極性的固定相之間進行分配，極性越大的糖越容易被洗脫。
檢測器：使用示差折光檢測器 (RID 或 RI)。因為糖類缺乏紫外吸收基團（無發(fā)色團），而RID能根據(jù)物質(zhì)折光率的不同進行檢測。注意：RID對溫度和流動相組成非常敏感，通常需要開機預熱數(shù)小時，且環(huán)境溫度需恒定。
色譜柱：氨基硅烷鍵合硅膠色譜柱 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm)。
流動相：乙腈 : 水 = 75 : 25 (體積比)。
流速：1.0 mL/min (等度洗脫)。
柱溫：30℃ - 40℃。
進樣量：10-20 μL。
針對常見的單糖和雙糖，主要有以下國家標準：
| 標準編號 | 標準名稱 | 適用范圍與特點 | 狀態(tài) |
|---|---|---|---|
| GB 5009.8-2023 | 《食品安全國家標準 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定》 | 目前最主流、最新國標。適用于食品中5種糖的測定。檢出限為0.2 g/100g，定量限為0.5 g/100g。 | 現(xiàn)行/強制 |
| GB/T 22221-2008 | 《食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定 高效液相色譜法》 | 早期的推薦性國家標準，原理一致，但已被GB 5009.8-2023部分替代或覆蓋。 | 被代替 |
| 歐盟法規(guī) (EC) No 2870/2000 | 烈性酒分析方法 | 針對酒精飲料中總糖的測定（轉(zhuǎn)化為轉(zhuǎn)化糖表示），明確了氨基柱和RI檢測器的配置。 | 國際標準 |
提取：通常用水提取。
除雜：使用乙酸鋅和亞鐵氰化鉀作為沉淀劑，去除蛋白質(zhì)等干擾物；若脂肪含量高（>10%），需先用石油醚脫脂。
稀釋：高糖樣品（如蜂蜜）需適當稀釋。
凝膠色譜（又稱體積排阻色譜）不用于測定單糖含量，而是用于分析大分子多糖（如膳食纖維、淀粉、菊粉）的分子量分布。
分離機制：根據(jù)分子在溶液中的流體動力學體積（分子尺寸）進行分離。大分子不能進入凝膠孔洞，先被洗脫出來；小分子進入孔洞，后被洗脫出來。
檢測器：通常串聯(lián)示差折光檢測器 (RI) 和多角度激光光散射檢測器 (MALLS)。RI測濃度，MALLS測絕對分子量，無需標準品即可計算。
色譜柱：凝膠過濾/滲透柱（如TSKgel G2500PWXL，或G4000PWxL），有時需要兩根串聯(lián)以達到更好的分離效果。
流動相：純水，或特定鹽溶液（如0.1M NaNO3）抑制靜電吸附。
流速：0.5 mL/min（流速需非常穩(wěn)定）。
柱溫：較高溫度（如80℃），防止多糖在柱內(nèi)形成氫鍵導致拖尾。
| 標準編號 | 標準名稱 | 核心應用 | 關(guān)鍵點 |
|---|---|---|---|
| GB 5009.88-2023 | 《食品安全國家標準 食品中膳食纖維的測定》 | 測定不可溶、可溶性和總膳食纖維。在測定可溶性膳食纖維時，需通過GPC分離去除小分子糖干擾。 | 強制國標 |
| 《中國藥典》2020年版 | 多糖分子排阻色譜法 | 用于多糖類藥物的分子量與分子量分布測定（如右旋糖酐、香菇多糖）。 | 藥典標準 |
在實際檢測中，可以根據(jù)目標分析物來選擇方法：
測“糖" (單糖/雙糖)：
目標：蜂蜜、飲料、乳制品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖。
方法：高效液相色譜法。
標準：GB 5009.8-2023。
配置：氨基柱 + 示差折光檢測器 (RI) + 乙腈/水流動相。
測“多糖" (分子量)：
目標：功能性食品原料、藥材提取物中的多糖分子量大小及分布（如靈芝多糖、枸杞多糖）。
方法：凝膠滲透色譜法。
標準：參照藥典或GB 5009.88。
配置：凝膠色譜柱 + RI檢測器 + (可選MALLS檢測器)。
特殊基質(zhì) (如乳制品中的低聚糖)：
針對復雜基質(zhì)，國際標準如ISO 22184:2021推薦使用高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法 (HPAEC-PAD)，該法靈敏度更高，無需衍生，但儀器成本也更高。
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