融合了重組酶介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（RAA）與CRISPR/Cas13a基因編輯系統(tǒng)的RAA - CRISPR/Cas13a檢測法為核酸檢測領(lǐng)域帶來了具有革命性意義的突破，顯著提升了檢測的便捷性、穩(wěn)定性，并拓展了其應(yīng)用范圍。此外，凍干技術(shù)的運(yùn)用保障了試劑的穩(wěn)定性與活性，使核酸檢測流程更為簡便。

RAA-CRISPR核酸檢測技術(shù)本身具有高靈敏度、高特異性和快速檢測的特點(diǎn)，能在短時(shí)間內(nèi)精準(zhǔn)識(shí)別目標(biāo)核酸序列，為疾病診斷、食品安全檢測、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。然而，該技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中，尤其是在資源有限或現(xiàn)場檢測場景下，仍面臨一些挑戰(zhàn)，如反應(yīng)試劑的儲(chǔ)存和運(yùn)輸需要嚴(yán)格的低溫條件，操作流程相對(duì)復(fù)雜，對(duì)操作人員的專業(yè)技能要求較高等。

凍干技術(shù)的引入，恰好解決了RAA-CRISPR技術(shù)在這些方面的難題。凍干球技術(shù)通過將含有RAA擴(kuò)增酶、CRISPR識(shí)別元件、引物探針以及其他必要反應(yīng)成分的混合液進(jìn)行冷凍干燥，形成結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、質(zhì)地疏松的凍干球。這種凍干球可在常溫下長時(shí)間保存，無需依賴?yán)滏溸\(yùn)輸與儲(chǔ)存，極大降低了物流成本，放寬了對(duì)儲(chǔ)存條件的要求，尤其適用于基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)、野外現(xiàn)場檢測以及資源匱乏地區(qū)的檢測。

在使用時(shí)，只需向恒溫?cái)U(kuò)增凍干球中加入待檢測的核酸樣本，凍干球便能迅速溶解，在常規(guī)的溫度環(huán)境下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)（RNA擴(kuò)增體系42℃25-30min，DNA擴(kuò)增體系39℃25-30min）.之后將CRISPR凍干球溶解，加入擴(kuò)增產(chǎn)物即可激活體系內(nèi)部的CRISPR/Cas13a進(jìn)行酶切反應(yīng)（42℃15-25min）。結(jié)果可熒光檢測（熒光探針法），也可用膠體金試紙檢測（免疫層析法）。這一過程操作簡便，結(jié)果直觀。極大簡化了傳統(tǒng)核酸檢測里復(fù)雜的試劑配制環(huán)節(jié)，降低了人為操作誤差，提升了檢測效率，即便非專業(yè)人員經(jīng)簡單培訓(xùn)也能迅速上手。

此外，凍干球技術(shù)能夠有效保護(hù)RAA-CRISPR體系中的生物活性成分，如酶和核酸探針，避免其在長期儲(chǔ)存過程中因溫度、濕度等環(huán)境因素影響而失活，從而保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。這種穩(wěn)定性也使得RAA-CRISPR檢測試劑盒的保質(zhì)期得到延長（2-10倍），有利于大規(guī)模生產(chǎn)、儲(chǔ)備和分發(fā)。

故，當(dāng)RAA-CRISPR核酸檢測技術(shù)遇上凍干技術(shù)，避開了使用常規(guī)PCR分析儀進(jìn)行分子診斷過程中的各種痛點(diǎn)：操作過程復(fù)雜，需要專業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作，檢測儀器昂貴，對(duì)低溫儲(chǔ)存/運(yùn)輸依賴，試劑保質(zhì)期不長，反復(fù)凍融影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，對(duì)實(shí)驗(yàn)場地要求高，測試過程容易被污染，導(dǎo)致測試失敗，檢測結(jié)果容易出現(xiàn)“假陽性”等。

綜上所述，結(jié)合了RAA-CRISPR核酸檢測技術(shù)與凍干技術(shù)的檢測產(chǎn)品，不僅繼承了CRISPR/Cas系統(tǒng)在提高檢測靈敏度和速度方面的優(yōu)勢，還通過凍干技術(shù)實(shí)現(xiàn)了檢測試劑的常溫化、便攜化和易用化。這種技術(shù)的結(jié)合為即時(shí)檢測（POCT）提供了快速、準(zhǔn)確的檢測手段，在疫情防控、傳染病處置、公共衛(wèi)生安全、環(huán)境安全、農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)發(fā)展等多個(gè)領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用價(jià)值。

合鯨科技研發(fā)出的新一代CRISPR核酸檢測系列產(chǎn)品，便是RAA-CRISPR核酸檢測技術(shù)與凍干技術(shù)結(jié)合應(yīng)用的，借助簡易耗材與設(shè)備，于45min內(nèi)完成病原體核酸檢測，快速、靈敏、特異、穩(wěn)定、便捷、無污染且耐儲(chǔ)運(yùn)。對(duì)人員操作、專業(yè)場地、精密儀器設(shè)備均無嚴(yán)格要求，適用于疫情防控、傳染病處置、生物安全事件等場景下的現(xiàn)場快速檢測（POCT）。

表1 合鯨科技的CRISPR核酸檢測系列產(chǎn)品及服務(wù)列表