??一、產(chǎn)品概述??

二、檢測原理??

• •
  ??細胞增殖越多，代謝活性越強，生成的甲臜越多，顏色越深（吸光度越高）??。
• •
  ??細胞毒性越大，活細胞數(shù)量減少，甲臜生成減少，顏色越淺（吸光度越低）??。
• •
  ??檢測波長??：通常為 ??450 nm??（最佳），也可選用 ??420-480 nm?? 或 ??600-650 nm（高渾濁樣本參考波長）??。

?三、使用方法??

??1. 細胞增殖/毒性實驗步驟??

1. 1.
   ??細胞接種??（96孔板）：
   • •
     ??細胞增殖實驗??：每孔加入 ??100 μL 細胞懸液（約2000個細胞）??。
   • •
     ??細胞毒性實驗??：每孔加入 ??100 μL 細胞懸液（約5000個細胞）??。
   • •
     （具體細胞數(shù)需根據(jù)細胞類型、生長速度調(diào)整）
2. 2.
   ??藥物處理??（可選）：
   • •
     按實驗設(shè)計加入 ??0-10 μL 藥物??，培養(yǎng) ??6、12、24 或 48 小時??。
3. 3.
   ??加入CCK-8試劑??：
   • •
     每孔加入 ??10 μL CCK-8溶液??（若初始培養(yǎng)體積為200 μL，則加20 μL）。
   • •
     ??空白對照??：僅含培養(yǎng)基+CCK-8（無細胞）。
   • •
     ??藥物對照??（可選）：含培養(yǎng)基+藥物+CCK-8（無細胞）。
4. 4.
   ??孵育??：
   • •
     ??37℃ 孵育 1-4 小時??（時間可通過預(yù)實驗優(yōu)化，通常2小時左右）。
5. 5.
   ??檢測吸光度??：
   • •
     使用 ??酶標儀?? 測定 ??450 nm?? 吸光度（OD值）。
   • •
     （若無450 nm濾光片，可用420-480 nm；高渾濁樣本可用600-650 nm作為參考波長）。
6. 6.
   ??短期保存（可選）??：
   • •
     若不能立即檢測，可向每孔加入 ??10 μL 0.1M HCl 或 1% SDS??，避光室溫保存 ??24小時內(nèi)?? 測定。

??2. 實驗結(jié)果計算??

• •
  ??細胞活力（%）?? = [OD(加藥) - OD(空白)] / [OD(0加藥) - OD(空白)] × 100%
• •
  ??抑制率（%）?? = [OD(0加藥) - OD(加藥)] / [OD(0加藥) - OD(空白)] × 100%

• •
  ??OD(加藥)??：含細胞+培養(yǎng)基+CCK-8+藥物的孔
• •
  ??OD(空白)??：僅含培養(yǎng)基+CCK-8（無細胞）
• •
  ??OD(0加藥)??：含細胞+培養(yǎng)基+CCK-8（無藥物）

四、注意事項??

1. 1.
   ??細胞接種密度??：需根據(jù)細胞類型調(diào)整，避免過度擁擠或過少影響檢測靈敏度。
2. 2.
   ??CCK-8試劑加入量??：確保與培養(yǎng)基比例合適（通常10 μL/100 μL培養(yǎng)基）。
3. 3.
   ??孵育時間??：不同細胞代謝速率不同，建議預(yù)實驗優(yōu)化孵育時間（1-4小時）。
4. 4.
   ??避免氣泡??：加樣時避免產(chǎn)生氣泡，否則會影響酶標儀讀數(shù)。
5. 5.
   ??空白對照設(shè)置??：必須設(shè)置無細胞的空白對照，以扣除背景干擾。
6. 6.
   ??藥物干擾??：某些藥物可能影響CCK-8反應(yīng)，可設(shè)置藥物對照孔驗證。
7. 7.
   ??檢測波長??：優(yōu)先選擇 ??450 nm??，若樣本渾濁可選用 ??600-650 nm?? 作為參考波長。
8. 8.
   ??短期保存??：若不能立即檢測，可加酸或SDS穩(wěn)定OD值，但需在24小時內(nèi)完成測定。
9. 9.
   ??避免反復(fù)凍融??：CCK-8溶液應(yīng)低溫保存，使用前平衡至室溫。