利用低滲作用:紅細(xì)胞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)脆弱,在低滲環(huán)境下快速吸水膨脹破裂;白細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞耐受更強(qiáng),可保持完整,后續(xù)離心即可去除裂解碎片與血紅蛋白。
紅細(xì)胞裂解液試劑的使用要點:
新鮮血液樣本先按1:3~1:10比例加入預(yù)冷裂解液,冰上孵育5~10分鐘,期間輕柔顛倒混勻;
裂解完成后離心,棄上清去除裂解的紅細(xì)胞碎片,沉淀即為有核細(xì)胞;
若紅細(xì)胞殘留較多,可重復(fù)裂解1次,避免殘留紅細(xì)胞影響后續(xù)實驗;
實驗結(jié)束后用PBS清洗細(xì)胞1~2次,去除殘留裂解液,避免影響細(xì)胞活性。
注意事項:
推薦冰上操作,室溫長時間孵育會導(dǎo)致裂解液滲透壓改變,損傷有核細(xì)胞;
處理不同樣本調(diào)整比例:全血一般1:5~1:10,脾臟/骨髓組織單細(xì)胞懸液一般1:3~1:5;
敏感細(xì)胞裂解時間要適當(dāng)縮短,避免過度裂解影響細(xì)胞活性;
廢液含有生物污染物,需按生物廢棄物規(guī)范處理。
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