單克隆抗體制備限于技術(shù)保護(hù)的原因，目前，兔單克隆雜交瘤細(xì)胞制備技術(shù)被一家公司壟斷，所以我們無(wú)法通過(guò)像類(lèi)似制備小鼠單克隆抗體那樣，制備兔源雜交瘤細(xì)胞獲得兔源單克隆抗體。為此，公司在一大批免疫學(xué)與基因工程學(xué)專(zhuān)家的幫助下，先后建立了兩套兔源單克隆抗體制備方案。這兩種方案均不依賴(lài)于兔源骨髓瘤細(xì)胞，但是其抗體的種源特性毫無(wú)疑問(wèn)是兔源，在保留兔源單克隆抗體優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，大大壓縮試驗(yàn)周期，提高試驗(yàn)成功率。
方案一噬菌體展示技術(shù)
M13單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)是目前應(yīng)用廣泛的文庫(kù)展示系統(tǒng)，通過(guò)將蛋白、抗體或多肽與噬菌體pIII蛋白融合表達(dá)，使之參與噬菌體組裝，并展示在噬菌體表面，形成噬菌體展示文庫(kù)。使用噬菌體展示文庫(kù)，針對(duì)特定靶分子進(jìn)行3-5 輪親和篩選，可以富集能特異性結(jié)合靶分子的噬菌體，得到相應(yīng)的DNA序列信息。
艾柏森（北京）生物科技有限公司目前開(kāi)發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺(tái)涵蓋了免疫抗體庫(kù)、天然抗體庫(kù)等常用的文庫(kù)類(lèi)型，可根據(jù)客戶(hù)的特殊需求定制個(gè)性化文庫(kù)，并提供靈活高效的篩選服務(wù)。在此技術(shù)儲(chǔ)備的基礎(chǔ)上，我們提供的兔源單克隆抗體噬菌體展示方案，可高效靈活的根據(jù)客戶(hù)需要大規(guī)模探測(cè)高親和力抗體，同時(shí)結(jié)合公司*的兔源Fc表達(dá)質(zhì)粒，與高效真核表達(dá)系統(tǒng)，使得我們的抗體擁有*的表達(dá)效率。
方案二重組抗體制備技術(shù)
艾柏森（北京）生物科技開(kāi)發(fā)出一種革命性的單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)，使單克隆抗體的生產(chǎn)不sha害動(dòng)物，不依賴(lài)雜交瘤。該技術(shù)通過(guò)分離培養(yǎng)B細(xì)胞，并利用ELISA、Western Blot、IHC（Immunohistochemistry）等方法篩選出抗原特異性B細(xì)胞。再通過(guò)分子克隆的手段重組表達(dá)完整的抗體分子。該技術(shù)可用于開(kāi)發(fā)高品質(zhì)的兔子和小鼠等不同物種的單克隆抗體。
其主要依托技術(shù)有：
高效的B細(xì)胞體外培養(yǎng)體系
高通量B細(xì)胞篩選技術(shù)
穩(wěn)定的VH和VL抗體分子表達(dá)體系
高通量的抗體分子測(cè)序平臺(tái)
兔子單克隆抗體制備服務(wù)項(xiàng)目
服務(wù)項(xiàng)目 (Service Items) | 周期（周） Time(weeks) | 方案一： 噬菌體展示技術(shù) （Phage Display） | 方案二： 異源表達(dá)重組技術(shù) (Heterogeneous Recombination) |
多肽 Peptide | 小分子 Molecular | 磷酸基/甲基/乙基化多肽 Phosphate/Methyl/ acetyl-specific | 目前只有針對(duì)部分腫瘤相關(guān)通路熱點(diǎn)分子的抗原，詳情請(qǐng)與公司技術(shù)人員溝通 |
多肽設(shè)計(jì)與合成 Peptide design & synthesis | 多肽設(shè)計(jì) Peptide design | ~2 | 可選，免費(fèi) |
多肽合成 Peptide synthesis | √ |
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小分子或多肽偶聯(lián) conjugation | √ |
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免疫階段 Immunization | 免疫2只兔子 Immunized 2 rabbits | ~8 | √ | √ | √ | √ |
ELISA檢測(cè) Elisa detection | √ | √ | √ | √ |
cDNA制備 cDNA preparation | 逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫(kù) prepare cDNA library by RT-PCR | ~1 | √ | √ | √ | √ |
cDNA 文庫(kù)質(zhì)檢 cDNA library QC check | √ | √ | √ | √ |
構(gòu)建Fab抗體庫(kù) Fab library construction | VH與VL基因獲得 obtained VH and VL genes | 10~15 | √ | √ | √ | √ |
構(gòu)建初級(jí)抗體庫(kù) primary antibody library construction | √ | √ | √ | √ |
構(gòu)建Fab抗體庫(kù) Fab library construction | √ | √ | √ | √ |
噬菌體篩選 phage screening | 噬菌體顆粒包裝 phage particles package | 10~15 | √ | √ | √ |
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磁珠親和篩選 magnetic beads affinity screening | √ | √ | √ |
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陽(yáng)性克隆回收基因測(cè)序 Recover positive clones and DNA sequencing | √ | √ | √ |
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抗體表達(dá) Antibody expression | 特異性雙鏈基因合成與Fc基因橋接 synthetic of target phage gene and Fc gene | ~5 | √ | √ | √ | √ |
構(gòu)建真核表達(dá)載體 Eukaryotic system expression plasmids construction | √ | √ | √ | √ |
真核表達(dá) Eukaryotic system expression | √ | √ | √ |
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穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建 Stably transfected cell line construction |
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純化與檢測(cè) Purification and detection | 標(biāo)簽純化 Tag affinity purification | ~1 | √ | √ | √ | √ |
特異性親和純化 Antigen specific affinity purification | √ | √ | √ | √ |
總周期（月） Total lead time(months) | 7~9 | 3~5 |
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注：
單克隆抗體制備價(jià)格面議；
請(qǐng)慎重考慮周期事宜，以上時(shí)間僅為理想條件下短周期；
為了縮短試驗(yàn)周期建議考慮自行提供抗原直接免疫做起；
免疫環(huán)節(jié)設(shè)立驗(yàn)收節(jié)點(diǎn)，效價(jià)合格，取脾臟，效價(jià)不合格，終止實(shí)驗(yàn)；
抗體庫(kù)構(gòu)建步驟啟動(dòng)之前，至少支付此步驟的50%全款；完成項(xiàng)目，支付尾款。
單克隆抗體制備服務(wù)組合:
客戶(hù)：提供抗原蛋白信息 |
制備流程： |
1）抗原制備質(zhì)粒表達(dá)蛋白純化多肽設(shè)計(jì)合成及交聯(lián)； |
2）免疫：*免疫兔子2只，失敗后又加免3只； |
3）ELISA/Western-blot試驗(yàn)監(jiān)控兔子血清中的抗體效價(jià)和特異性，根據(jù)ELISA和WB檢測(cè)，篩選兔子； |
4）cDNA文庫(kù)制備與噬菌體載體構(gòu)建； |
5）磁珠鏈霉素親和篩選； |
6）陽(yáng)性克隆測(cè)序與基因合成橋接； |
7）真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建； |
8）穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞構(gòu)建； 9）試表達(dá)鑒定與結(jié)果交付； |
交付產(chǎn)品（每種抗原，所有兔子總共的） |
1）1株針對(duì)免疫原特異性的單克隆雜交瘤細(xì)胞株 |
2）1ml（濃度約0.1~1mg/ml）純化的抗體，Elisa效價(jià)應(yīng)至少1:200以上； |
制備時(shí)間：3~6個(gè)月 |
兔子單克隆抗體制備成功案例： |
Publication: Plos One | IF：3.05 |
Title：TSC1/2 signaling complex is essential for peripheral na?ve CD8+ T cell survival and homeostasis in mice. | Name：anti- Tuberin antibody |
Species: Mouse | Type：Rabbit Recombination Monoclonal antibody |
Immunohistochemical analysis ofparaffin-embedded mouse placenta tissue using anti-Tuberin antibody. Counterstained with hematoxylin.
Recommended constration: 1:200
